豬圓環(huán)病毒II型ORF2真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及免疫抗體檢測(cè)研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、本研究采用本課題組分離鑒定的豬圓環(huán)病毒分離株P(guān)CV2WHN，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，用PCR擴(kuò)增出PCV2的ORF2基因，并克隆到pUCm-T載體上，測(cè)序得ORF2基因全長(zhǎng)705bp，編碼234個(gè)氨基酸?！　∮肒pnI和BamHI雙酶切的方法處理pUCm-PCV-ORF2和真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)，進(jìn)行連接反應(yīng)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，酶切和PCR鑒定結(jié)果表明，成功構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-PCV-ORF2。用堿裂解法提取并純化真

2、核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-PCV-ORF2?！　∮谜婧吮磉_(dá)質(zhì)粒pcDNA-PCV-ORF2免疫小鼠(第一次免疫后兩周進(jìn)行第二次免疫)，用間接ELISA方法檢測(cè)免疫抗體的結(jié)果表明，第一次免疫后一周產(chǎn)生抗體，二免后，小鼠的抗體水平迅速上升，在第4周達(dá)到高峰，其后緩慢下降，可持續(xù)11周以上。　　用PCR檢測(cè)了pcDNA-PCV-ORF2的機(jī)體組織器官中的動(dòng)態(tài)分布。表明，首免后3h到28d小鼠的各種組織器官中均能擴(kuò)增出目的基因片段。在第44d腦

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