粗糙脈孢菌物理——化學(xué)誘變及分子驗證.pdf

1、粗糙脈孢菌(Neurosporacrassa)是子囊菌門(Ascomycoya)，子囊菌綱(Ascomycetes)，球殼亞綱(Sordariomycetidae)，糞殼目(Sordariales)，糞殼科(Sordariaceae)，脈孢菌屬(Neurospora)的真菌。在本試驗中采用了紫外線，微波，甲基磺酸乙酯(EMS)，平陽霉素(PYM)等四種不同的誘變劑對粗糙脈孢菌分別進(jìn)行了誘變處理，對于獲得的誘變菌株進(jìn)行了分離，篩選，保存，

2、并且依照以下的標(biāo)準(zhǔn)在形態(tài)結(jié)構(gòu)上與原始菌種進(jìn)行了比較： 1菌絲體細(xì)胞壁上有無條紋及條紋的形狀。 2分生孢子的形狀。 3分生孢子細(xì)胞壁上有無條紋及條紋的形狀。 4菌絲體以及分生孢子的顏色變化。 結(jié)果表明：1大多數(shù)的誘變菌株在形態(tài)上發(fā)生了較大的變化，可以從形態(tài)結(jié)構(gòu)上與原始菌種進(jìn)行區(qū)別。而有少部分的誘變菌株則在形態(tài)上沒有發(fā)生較大的變化，不能從形態(tài)上與原始菌種進(jìn)行區(qū)分。對于這部分不能從形態(tài)上與原始菌株區(qū)分的

3、誘變菌株則采用了分子生物學(xué)的方法(主要是RAPD)對其進(jìn)行了分析。 2紫外誘變最適的處理條件為：C(1×104/ml)濃度照射10min，D(1×103/ml)濃度照射5min。在本文中對紫外在形態(tài)上的影響進(jìn)行了初步的研究。發(fā)現(xiàn)，用紫外誘變，也可以獲得形態(tài)上與原始菌株直接區(qū)分突變的突變菌株，而對于部分不能從形態(tài)上直接區(qū)分的菌株則可以采用分子的手段進(jìn)行區(qū)分。 3在用微波進(jìn)行誘變處理的時候，在短時間以及長時間進(jìn)行照射的時候(

4、10s-40s、120s)可以取得比較好的效果，所得到的突變菌株采用顯微鏡觀測即可進(jìn)行區(qū)分，但是在中等時間照射的條件下，效果并不是很明顯，所得到的突變菌株不能通過顯微鏡觀測進(jìn)行區(qū)分，需要采用分子的手段進(jìn)行區(qū)分。從照射方法上看，直接照射易于使菌絲體發(fā)生變化，累計照射更易于使分生孢子發(fā)生變化。從孢子濃度上看，在采用直接照射的時候，益采用C濃度，而在采用累積照射的時候，兩種濃度均可。 4用EMS進(jìn)行誘變處理，在30分鐘-4小時、8小時

5、-48小時可以取得比較好的效果，所得到的突變菌株采用顯微鏡觀測即可進(jìn)行區(qū)分。從EMS濃度上看，中、低濃度(X、Y)效果要稍好。從孢子濃度上看，D濃度要更加理想一些。 5用平陽霉素進(jìn)行誘變處理，30分鐘-2小時、6小時-24小時都可以獲得較好的誘變效果。從誘變劑的濃度上看，低濃度(α)效果要稍好。從孢子濃度上看，低誘變劑的濃度采用低孢子濃度，而高誘變劑的濃度采用低孢子濃度要更加理想一些。 6從綜合的試驗結(jié)果上看，平陽霉素的