免疫金標(biāo)記技術(shù)快速檢測轉(zhuǎn)Bt基因棉抗性的研究.pdf

1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文免疫金標(biāo)記技術(shù)快速檢測轉(zhuǎn)Bt基因棉抗性的研究姓名：王清申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：吳振廷20050601試紙條具體操作步驟如下：( 1 ) 取出試紙條恢復(fù)至室溫。( 2 ) 將有膠體金復(fù)合物端插入檢測樣品。( 3 ) 1 0 一2 0 m i n 判斷結(jié)果。( 4 ) 結(jié)果判斷a ．試紙條僅質(zhì)控點( 加羊抗兔抗體) 出現(xiàn)一紫紅色點者判為正常( 陰性結(jié)果) 。b ．試紙條上出現(xiàn)兩個紫紅色點者

2、為陽性結(jié)果。C ．試紙條兩端都沒有紫紅色點出現(xiàn)者則為無效結(jié)果。說明此試紙條已經(jīng)失效。試紙條靈敏度測試試驗結(jié)果表明，試紙條檢測極限為l O n g ／m l 。試紙條4 ℃干燥保存一個月后再進行試驗，結(jié)果穩(wěn)定。4 ．檢測8 t 毒蛋白免疫斑點金染色法模型的建立本文建立了用免疫斑點金染色法檢測B t 毒蛋白的檢測模型，其具體方法為在M i l I p o r e 孔徑為0 ．4 5 um 硝酸纖維素膜( N C ) ，畫出O ．8 c m

3、見方的格子，在格子中央點待測樣品l ul ，自然晾干。用0 ．O I Mp H 7 ．2 的P B S 洗滌后，將硝酸纖維素膜( N C膜) 置于封閉液中，室溫孵育3 0 m i n 后，分別用蒸餾水和0 ．O I M p H 7 ．2 的P B S 洗滌數(shù)次。再將硝酸纖維素膜浸泡于稀釋4 倍的金標(biāo)抗體溶液中，置于室溫孵育3 0 m i n ，觀察結(jié)果：出現(xiàn)紫紅色為斑點陽性結(jié)果，無紫紅色斑點則為陰性結(jié)果。其檢測極限為1 6 n g ／m