利用Cre-IoxP系統(tǒng)刪除轉(zhuǎn)Bt基因水稻中的標記基因.pdf

1、水稻是我國第一大糧食作物。螟蟲是影響水稻生產(chǎn)的主要害蟲，每年造成的產(chǎn)量損失達上千噸。培育抗蟲害品種已成為水稻品種選育的重要目標。近年來，植物基因工程為防治蟲害開辟了新的途徑，正逐步成為常規(guī)育種方法。
　　 利用基因工程將抗蟲基因引入植物的同時，通常會帶入選擇標記基因， 但隨著轉(zhuǎn)化體的繼代，抗性選擇基因不再需要，這些基因就成為“累贅”，并且有可能會帶來生物安全性問題。因此，培育無標記基因的轉(zhuǎn)基因作物已成為植物基因工程的發(fā)展方向。<

2、br>　　 “定向剔除”是一條可行的技術(shù)路徑。來源于噬菌體P1的Cre/loxP系統(tǒng)，是當前植物遺傳轉(zhuǎn)化中應(yīng)用較多，較為成熟的標記基因刪除的系統(tǒng)。在這個系統(tǒng)中，Cre酶可以特異性的識別和切割位于兩個lox位點之間的選擇標記基因，整個重組系統(tǒng)僅需Cre和lox識別位點即可完成，無需其它輔助因子的參加。
　　 本研究主要結(jié)果概括如下：
　　 1.本文研究了水稻愈傷組織的培養(yǎng)、篩選條件：32℃光培養(yǎng)有利于愈傷誘導(dǎo)，28℃暗

3、培養(yǎng)篩選抗性愈傷，提高分化率。
　　 2.本研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功地將攜帶Cre基因的表達載體pCAMBIA1305.1Cre導(dǎo)入安徽主栽水稻品種“皖粳97”，PCR擴增檢測轉(zhuǎn)化植株中的目的基因，結(jié)果顯示，外源基因已經(jīng)成功整合到水稻基因組中。
　　 3.本研究使用了能定向切除標記基因的Cre/loxP定位重組系統(tǒng)。攜帶Cre基因的T0代水稻植株（作為父本），與先期轉(zhuǎn)基因育成的攜帶loxp-hpt-loxp-bt基因