轉Bt融合基因cry1Ab-vip3DA抗蟲轉基因水稻的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，簡稱Bt)是一種廣泛應用于農業(yè)害蟲生物防治的細菌。Bt在芽孢形成時會產生殺蟲晶體蛋白(Insecticidal CrystalProteins，ICPs)，包括晶體毒素(crystal toxin，Cry)和細胞裂解素(cytolytic toxin，Cyt)。Cry毒素是目前研究最深入、應用最廣泛的Bt殺蟲毒素。Bt在營養(yǎng)生長期間還會分泌另外一種殺蟲蛋白，即營養(yǎng)期殺蟲蛋白(

2、vegetative insecticidalproteins，Vip)。研究表明Vip蛋白與Cry毒素在氨基酸序列上沒有同源性，并且殺蟲機理也不同。本論文設計了一個由Cry毒素和Vip蛋白融合而成的抗蟲基因cry1Ab-vip3DA，并利用農桿菌介導法轉入水稻，獲得了轉基因抗蟲水稻。
　　 根據(jù)單子葉植物密碼子偏好性改造DNA序列，并設計合成了一個融合基因cry1Ab-vip3DA。這個基因和玉米泛素啟動子(ZmUbi-1)、

3、玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)終止子連接形成抗蟲基因表達框。這個表達框被克隆到以抗草甘膦基因G170為篩選標記的T-DNA水稻轉化載體中，獲得了抗蟲抗草甘膦的水稻轉化載體1300-Ubi-cry1Abvip3DA-G170。通過農桿菌介導法將這個T-DNA轉入到水稻中。對獲得的轉基因水稻進行PCR鑒定，結果顯示融合基因cry1Ab-vip3DA已成功轉入水稻。提取轉基因水稻葉片蛋白質進行Western Blot檢測，結果顯示抗蟲

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