轉(zhuǎn)Bt融合基因cry1Ab-vip3DA抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt)是一種廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)害蟲生物防治的細(xì)菌。Bt在芽孢形成時(shí)會(huì)產(chǎn)生殺蟲晶體蛋白(Insecticidal CrystalProteins，ICPs)，包括晶體毒素(crystal toxin，Cry)和細(xì)胞裂解素(cytolytic toxin，Cyt)。Cry毒素是目前研究最深入、應(yīng)用最廣泛的Bt殺蟲毒素。Bt在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期間還會(huì)分泌另外一種殺蟲蛋白，即營(yíng)養(yǎng)期殺蟲蛋白(

2、vegetative insecticidalproteins，Vip)。研究表明Vip蛋白與Cry毒素在氨基酸序列上沒(méi)有同源性，并且殺蟲機(jī)理也不同。本論文設(shè)計(jì)了一個(gè)由Cry毒素和Vip蛋白融合而成的抗蟲基因cry1Ab-vip3DA，并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入水稻，獲得了轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻。
　　 根據(jù)單子葉植物密碼子偏好性改造DNA序列，并設(shè)計(jì)合成了一個(gè)融合基因cry1Ab-vip3DA。這個(gè)基因和玉米泛素啟動(dòng)子(ZmUbi-1)、

3、玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)終止子連接形成抗蟲基因表達(dá)框。這個(gè)表達(dá)框被克隆到以抗草甘膦基因G170為篩選標(biāo)記的T-DNA水稻轉(zhuǎn)化載體中，獲得了抗蟲抗草甘膦的水稻轉(zhuǎn)化載體1300-Ubi-cry1Abvip3DA-G170。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將這個(gè)T-DNA轉(zhuǎn)入到水稻中。對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因水稻進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果顯示融合基因cry1Ab-vip3DA已成功轉(zhuǎn)入水稻。提取轉(zhuǎn)基因水稻葉片蛋白質(zhì)進(jìn)行Western Blot檢測(cè)，結(jié)果顯示抗蟲

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