轉(zhuǎn)Bt cryBa3和Bt cylIa8基因抗蟲花椰菜的研究.pdf

1、花椰菜(Brassica oleracea Var.botrytis)是十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的一個(gè)變種，是一種營養(yǎng)豐富、具有食療保健功能的蔬菜，因而被國內(nèi)外廣泛種植。但該類蔬菜易受蟲害，嚴(yán)重影響了其品質(zhì)和產(chǎn)量，害蟲以鱗翅目的菜青蟲(Pieris rapae)和小菜蛾(Plutella xylostella)為主。目前廣泛使用化學(xué)防治措施，但此方法費(fèi)用昂貴且破壞環(huán)境。培育抗蟲花椰菜品種是既經(jīng)濟(jì)又較環(huán)保的途徑之一。然而，花椰菜抗蟲種質(zhì)資源的

2、匱乏，用傳統(tǒng)育種方法很難培育抗蟲花椰菜品種。植物基因工程技術(shù)的發(fā)展，為創(chuàng)制抗蟲花椰菜品種提供了一個(gè)嶄新的途徑。Bt cry1Ba3和Bt cry1Ia8基因是由本研究組自主分離克隆所得，經(jīng)研究證明兩者表達(dá)產(chǎn)物均對小菜蛾具有高毒力，且與Cry1Ac和Cry1Ab蛋白無交互抗性。因此為擴(kuò)大殺蟲譜、延緩害蟲抗性、培育抗蟲新品種提供了良好的基因資源。
　　 本研究利用根癌農(nóng)桿菌方法將cry1Ba3和cry1Ia8基因轉(zhuǎn)入花椰菜中，并對獲

3、得的轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行了分子鑒定和生物活性檢測。首先，用PCR鑒定了目的基因是否轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)化植株中，之后挑取PCR陽性植株進(jìn)行Southern blot檢測目的基因插入的拷貝數(shù)；利用Western blot鑒定方法檢測目的蛋白是否在這些陽性植株中正確表達(dá)；通過室內(nèi)葉片離體飼喂昆蟲實(shí)驗(yàn)，檢測轉(zhuǎn)基因植株分別對敏感小菜蛾和對Cry1Ac產(chǎn)生抗性的小菜蛾的抗性水平。主要成果如下：⑴構(gòu)建了含有cry1Ba3基因及雙LR邊界的植物表達(dá)載體pCs1Ba-LR；

4、⑵獲得了4株轉(zhuǎn)Bt cry1Ia8基因的單拷貝轉(zhuǎn)基因植株且目的蛋白均正確表達(dá)，飼喂敏感小菜蛾實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其中1株為高抗級別，2株為抗性級別；⑶獲得了5株轉(zhuǎn)Bt cry1Ba3基因的PCR陽性植株，目前已鑒定出3株為單拷貝植株且目的蛋白均正確表達(dá)，蟲測結(jié)果表明其中2株對敏感小菜蛾和抗性小菜蛾均達(dá)到高抗級別。本次研究的創(chuàng)新點(diǎn)在于構(gòu)建了含T-DNA雙邊界的植物高效表達(dá)載體，提高了獲得無選擇標(biāo)記的植株的概率，從而提高轉(zhuǎn)基因作物的生物安全性；將c