分子標記技術(shù)簡介

1、分子標記技術(shù)簡介分子標記技術(shù)簡介分子標記是以個體間遺傳物質(zhì)內(nèi)核苷酸序列變異為基礎(chǔ)的遺傳標記，是DNA水平遺傳多態(tài)性的直接的反映。與其他幾種遺傳標記——形態(tài)學(xué)標記、生物化學(xué)標記、細胞學(xué)標記相比，DNA分子標記具有的優(yōu)越性有：大多數(shù)分子標記為共顯性，對隱性的性狀的選擇十分便利；基因組變異極其豐富，分子標記的數(shù)量幾乎是無限的；在生物發(fā)育的不同階段，不同組織的DNA都可用于標記分析；分子標記揭示來自DNA的變異；表現(xiàn)為中性，不影響目標性狀的表達

2、，與不良性狀無連鎖；檢測手段簡單、迅速。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在DNA分子標記技術(shù)已有數(shù)十種，廣泛應(yīng)用于遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關(guān)系鑒別、基因庫構(gòu)建、基因克隆等方面。分子標記的概念有廣義和狹義之分。廣義的分子標記是指可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標記是指能反映生物個體或種群間基因組中某種差異的特異性DNA片段。理想的分子標記必須達以下幾個要求：(1)具有高的多態(tài)性；(2)共顯性遺傳，即利用分子標記可

3、鑒別二倍體中雜合和純合基因型；(3)能明確辨別等位基因；(4)遍布整個基因組；(5)除特殊位點的標記外，要求分子標記均勻分布于整個基因組；(6)選擇中性(即無基因多效性)；(7)檢測手段簡單、快速(如實驗程序易自動化)；(8)開發(fā)成本和使用成本盡量低廉；(9)在實驗室內(nèi)和實驗室間重復(fù)性好(便于數(shù)據(jù)交換)。但是，目前發(fā)現(xiàn)的任何一種分子標記均不能滿足以所有要求。及分型、遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建、疾病的基因診斷等研究中仍得到了廣泛的應(yīng)用。②數(shù)目可變

4、串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性(Variable(VariableNumberNumberofofTemTemRepeatsRepeats，VNTRVNTR)數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列又稱小衛(wèi)星DNA(MinisatelliteDNA)，是一種重復(fù)DNA小序列，為10到幾百核苷酸，拷貝數(shù)10一10001不等。VNTR基本原理與RFLP大致相同，只是對限制性內(nèi)切酶和DNA探針有特殊要求：(1)限制性內(nèi)切酶的酶切位點必須不在重復(fù)序列中，以保

5、證小衛(wèi)星或微衛(wèi)星序列的完整性。(2)內(nèi)切酶在基因組的其他部位有較多酶切位點，則可使衛(wèi)星序列所在片段含有較少無關(guān)序列，通過電泳可充分顯示不同長度重復(fù)序列片段的多態(tài)性。(3)分子雜交所用DNA探針核昔酸序列必須是小衛(wèi)星序列或微衛(wèi)星序列，通過分子雜交和放射自顯影后，就可一次性檢測到眾多小衛(wèi)星或微衛(wèi)星位點，得到個體特異性的DNA指紋圖譜。小衛(wèi)星標記的多態(tài)信息含量較高，在17一19之間。缺點是數(shù)量有限，而且在基因組上分布不均勻，這就極大限制其在基