利用分子標(biāo)記技術(shù)分析鑒定雜交油菜種子純度研究.pdf

1、油菜是我國的主要油料作物之一，利用油菜的雜種優(yōu)勢是提高產(chǎn)量和改良品質(zhì)的重要途徑，我國雜交油菜播種面積已占總播種面積的50％以上。雜交種能否發(fā)揮其雜種優(yōu)勢關(guān)鍵是種子純度，雜交油菜中的主要雜株類型是不育系株和恢復(fù)系株，所以，雜交油菜種子純度的鑒定即是雜交種與其父母本的鑒別。 本實驗應(yīng)用RAPD和SSR分子標(biāo)記技術(shù)，以甘藍(lán)型油菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育雜交種秦優(yōu)7號及其親本不育系陜3A、恢復(fù)系K407為材料，對雜交油菜種子純度鑒定技術(shù)進(jìn)行了比較

2、研究，獲得了以下主要結(jié)果： 1.通過對814個RAPD隨機(jī)引物和100對SSR引物的篩選，獲得2個RAPD引物(S93和S469)和1對SSR引物(SA82)，能將秦優(yōu)7號雜交種及其父母本同時區(qū)分開來；雜交種帶型表現(xiàn)為父母本的互補(bǔ)帶型，區(qū)別明顯，顯帶清晰穩(wěn)定。 2.建立了油菜微量DNA快速提取技術(shù)，用發(fā)芽3-5d的幼芽，在樣品研磨前加入氯仿，使蛋白變性和大多數(shù)酶失活或鈍化，防止DNA降解；省去了“抽提”和“清洗”等步驟，

3、使提取大大簡化；同時還縮短了水浴、冰浴和離心時間，加快了提取速度，提高了提取效率。 3.通過反應(yīng)體系的優(yōu)化，建立了適宜于雜交油菜種子純度鑒定的RAPD和SSR反應(yīng)體系。RAPD和SSR擴(kuò)增體系為：20μL反應(yīng)體積中，10×buffer[含(NH4))2SO4]2.0μL，Mg2+濃度2.0mmol/L,dNTP濃度0.2mmol/L，1U的TaqDNA聚合酶，模板DNA30-40ng，RAPD隨機(jī)引物濃度0.25μmol/L，S

4、SR左、右引物各2.5ng/μL。SSR反應(yīng)程序選用了梯度遞減的退火溫度，提高擴(kuò)增結(jié)果穩(wěn)定性。 4.與酯酶同工酶法比較，RAPD和SSR技術(shù)能夠?qū)Ⅴッ竿γ阜y以鑒別的雜交種秦優(yōu)7號及其親本恢復(fù)系明顯區(qū)分開來。SSR與RAPD標(biāo)記比較，SSR具有穩(wěn)定性好和帶型簡單易于鑒別的特點，在雜交油菜種子純度鑒定中有著廣闊的應(yīng)用前景。 5.RAPD和SSR分子標(biāo)記技術(shù)，在篩選合適引物的基礎(chǔ)上，按照快速法提取DNA，建立標(biāo)準(zhǔn)化的檢測體