小鼠胚胎生殖細(xì)胞的分離與培養(yǎng).pdf

1、　　本研究以昆明白小鼠胎兒為材料，從原始生殖細(xì)胞分離培養(yǎng)出EG細(xì)胞，并進(jìn)行傳代培養(yǎng)和鑒定，對(duì)影響胚胎生殖細(xì)胞(EG)分離與培養(yǎng)的因素進(jìn)行了探討，為進(jìn)一步建立昆明白小鼠EG細(xì)胞系奠定了基礎(chǔ)。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1)從8.5～12.5dpc的昆明白小鼠胎兒分離培養(yǎng)胎兒原始生殖細(xì)胞，最高傳至9代。2)試驗(yàn)比較了不同分離方法對(duì)小鼠胎兒原始生殖細(xì)胞分離的影響，發(fā)現(xiàn)分次消化分離效果好于一次消化。3)試驗(yàn)比較了不同傳代方法對(duì)小鼠胚胎生殖細(xì)胞細(xì)胞傳代的影

2、響，發(fā)現(xiàn)“消化+機(jī)械離散法”，“消化+吹打法”和“消化+連續(xù)離散法”均可用于EG細(xì)胞的傳代。“消化+連續(xù)離散法”和“消化+吹打法”操作簡(jiǎn)單，省時(shí)省力，也能夠很好的保持細(xì)胞的增殖活力。4)試驗(yàn)以三種培養(yǎng)液培養(yǎng)小鼠PGCs，在原代培養(yǎng)時(shí)，都能克隆出EG細(xì)胞集落，小鼠胎兒肝細(xì)胞條件培養(yǎng)液可以支持小鼠PGCs的生長(zhǎng)和增殖；而在傳代過(guò)程中，以含LIF1000IU/mL組培養(yǎng)效果最好，其次是小鼠胎兒肝細(xì)胞條件培養(yǎng)液，未添加細(xì)胞因子的EG細(xì)胞培養(yǎng)液組