人胚胎生殖細胞移植治療豬心肌梗死及心肌再生.pdf

1、目的：1.建立太湖小型豬急性心肌梗死的實驗動物模型；2.觀察人胚胎生殖細胞(human embryonic germ cells，hEGCs，人EG細胞)在豬急性心肌梗死模型心臟組織中的存活及分化再生狀況；3.探討人胚胎生殖細胞移植心肌組織后堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的表達及其意義。
　　 方法：取5-10周人胚胎生殖腺嵴，采用組織塊培養(yǎng)法體外分離培養(yǎng)人EG細

2、胞。取太湖小型豬2只，在氣管插管、呼吸機輔助呼吸、心電監(jiān)護的基礎上，開胸結扎冠狀動脈左前降支(left anterior descending branch，LAD)，建立豬急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型。建模成功后隨機分為移植組和對照組，移植組將體外培養(yǎng)的人EG細胞直接注射到心肌梗死的邊緣區(qū)，對照組以同樣方法注入等量PBS。術后2周處死小型豬，取出心臟組織。以鼠抗人細胞核抗體MAB1

3、281為示蹤劑，用免疫組織化學方法檢測移植細胞的分布及存活情況，觀察心肌形成轉(zhuǎn)錄因子NKx2.5和心肌肌鈣蛋白T(cTnT）在移植組豬心臟組織的陽性表達；將人EG細胞與人胚胎心肌細胞共培養(yǎng)來模擬心肌微環(huán)境，采用ABC-ELISA法檢測細胞培養(yǎng)第3天和第9天上清液中bFGF的表達，并與人EG細胞單獨培養(yǎng)相比較，探討人EG細胞移植心肌組織后bFGF的表達及意義。
　　 結果：LAD結扎后心電圖及心臟組織學觀察證實豬AMI模型制作成功

4、；人EG細胞異種異體移植于豬AMI模型，免疫組織化學檢測結果顯示，移植組心肌梗死區(qū)鼠抗人細胞核抗體MAB1281陽性表達，同時可觀察到新生的心肌細胞，這些細胞呈NKx2.5和cTnT陽性表達，對照組陰性表達；人EG細胞與心肌細胞共培養(yǎng)上清液中bFGF的表達量比同一時間人EG細胞單獨培養(yǎng)均顯著增加(P<0.05)。
　　 結論：1.成功地建立太湖小型豬急性心肌梗死的動物模型；2.人EG細胞移植此模型心肌組織中不僅能存活，而且呈現(xiàn)向