2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討人臍帶間質干細胞(human umbilical cord mesenchymalstem cells hUCMSC)的分離培養(yǎng)及其生物學特性。開展hCMSC慢病毒轉基因抗腫瘤的初步研究。 方法:采用組織塊貼壁培養(yǎng)方法獲得hUCMSC,并對其進行體外培養(yǎng),應用PKH26和二咪基苯基吲哚(DAPI)染色方法進行形態(tài)學觀察;應用流式細胞術測定細胞周期及表面抗原特征FITC-CD34,CD71,HLA-DR,PE-CD29,

2、CD38,CD44,CD105和HLA-I;染色體遺傳分析及繪制生長曲線;利用地塞米松、維生素C、β-磷酸甘油、bFGF和地塞米松、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、胰島素、消炎痛誘導第3代HuCMSC分別向成骨細胞和脂肪細胞分化,并通過堿性磷酸酶(ALP)、Von Kossa和油紅O染色進行檢測;通過PCR,RT-PCR等方法檢測相關基因的表達。構建融合基因TNFα-Tumstatin的慢病毒載體,采用磷酸鈣轉染方法轉染293T細胞和hUC

3、MSC,通過PCR,RT-PCR,ELISA,H-TdR檢測融合基因及其蛋白的表達,觀察抑制腫瘤生長的效果。 結果:hUCMSC在培養(yǎng)了兩周后,大多呈纖維狀生長,細胞傳至第2代時,則為均一的長梭形細胞。在經(jīng)PKH26和DAPI染色后,可見細胞有一個藍色的平滑的核,胞漿呈紅色,并可維持20天左右。在傳代4個月后(約26代),細胞仍然保持了其生物學特性。流式分析顯示:CD29,CD44,CD95,CD105,HLA-I表達陽性,CD

4、34,CD38,CD71,HLA-DR不表達。染色體核型正常。第3代細胞周期分析顯示:G<,0>G/<.1>,G<,2>/M和S期分別為88.86%,5.69%和5.45%。經(jīng)過體外誘導,ALP、Von Kossa和油紅O染色均呈不同程度的陽性,RT-PCR.結果顯示,誘導后的細胞分別表達了骨形成蛋白.3(BMP-3)和過氧化物酶體增殖體激活受體Y2(PPARγ2)等基因。hUCMSC還表達了骨髓MSC所表達的BMI-1和nucleos

5、temin基因。成功構建融合基因TNFα-Tumstatin的慢病毒載體,包裝293T細胞后可見綠色熒光,轉染效率可達50%以上,在轉化293T和hUCMSC后,基因組中可檢測到融合基因,表明轉染成功。慢病毒上清中可以檢測到融合蛋白的表達并且對腫瘤細胞L1937(人髓系白血病細胞株)具有抑制作用。 結論:JUCMSC具有與骨髓。MSC相似的生物學特性,尤其具有向成骨細胞和成脂肪細胞分化的多潛能性特點。hUCMSC的慢病毒轉基因抗

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