葉酸介導(dǎo)硫酸長(zhǎng)春堿納米靶向制劑的制備及體外功能分析.pdf

1、長(zhǎng)春堿是從夾竹桃科植物長(zhǎng)春花(Catharanthus roseus)中分離得到的一種具有抗癌活性的生物堿。從70年代起,長(zhǎng)春堿開(kāi)始被應(yīng)用于臨床治療腫瘤,主要用于治療何杰金氏病、乳腺癌、非小細(xì)胞性肺癌等。臨床上應(yīng)用的長(zhǎng)春堿被制成硫酸長(zhǎng)春堿(vinblastine sulfate,VBLS)注射劑,水溶性雖然有所改善,但是仍然存在著半衰期短,神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道系統(tǒng)毒性強(qiáng)的缺點(diǎn)。
　　 應(yīng)用于研究生命現(xiàn)象的納米技術(shù)被稱(chēng)為納米生物技術(shù),

2、它是納米技術(shù)和生物學(xué)的結(jié)合。納米材料因其粒徑的改變而獲得一系列特性,如量子尺寸效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)、表面和界面效應(yīng)。納米微粒的尺寸一般比生物體內(nèi)的細(xì)胞小得多,這就為生物學(xué)研究提供了一個(gè)新的研究途徑。納米藥物載體是目前納米生物技術(shù)的重要研究領(lǐng)域,主要應(yīng)用于抗腫瘤等藥物的靶向或局部給藥制劑。本課題利用納米生物技術(shù)改造VBLS,在降低其毒副作用的同時(shí),增加藥物靶向性、提高生物利用度,使VBLS成為更有效的抗癌藥物。
　　 本課題針對(duì)VBL

3、S臨床應(yīng)用毒副作用大,無(wú)靶向性的缺點(diǎn),利用去溶劑法制備VBLS納米靶向注射制劑。課題內(nèi)容包括利用中心點(diǎn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)法(Central Composite Designs,CCD)優(yōu)化牛血清白蛋白(BSA)制備納米粒工藝,運(yùn)用微觀檢測(cè)手段檢測(cè)白蛋白納米粒(BSANP)的各項(xiàng)物理特性,并研究了葉酸、白蛋白硫酸長(zhǎng)春堿(FA-BSANP-VBLS)靶向制劑體外釋放性質(zhì)及穩(wěn)定性。通過(guò)體外PC-3癌細(xì)胞系MTT實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)對(duì)納米靶向注射制劑做功能

4、分析。以此獲得具有優(yōu)良穩(wěn)定性、高生物利用度、腫瘤靶向性的VBLS納米注射制劑及其相應(yīng)的制備工藝和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
　　 本研究得出:
　　 1.制備粒徑為150 nm BSANP的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件為:BSA濃度3.21 mg/mL,乙醇加入速率2.96 mL/min,乙醇量4.23 mL,交聯(lián)度20％。得到的BSANP表面活性氨基數(shù)為668.973nmol/mg。原子力顯微鏡(Atomic Force Microscope,A

5、FM)觀察發(fā)現(xiàn)得到的BSANP形狀規(guī)則,粒徑與激光粒度儀測(cè)定結(jié)果相符合。
　　 2.在一定程度上可以通過(guò)控制加入交聯(lián)劑戊二醛的量來(lái)控制BSANP表面剩余活性氨基數(shù)量,從而控制偶聯(lián)上的葉酸量。在用本實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化得到的BSANP制備FA-BSANP時(shí),有383.996μmol葉酸偶聯(lián)到BSANP上。
　　 3.用三組粒徑不同的FA-BSANP和不同比例的VBLS:FA-BSANP做實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),粒徑越大,包封率和載藥量越大。在粒徑

6、相同時(shí),隨著VBLS:FA-BSANP比例的增加,包封率和載藥量也增加。粒徑為156.6 nm時(shí)(優(yōu)化組),最大包封率和載藥量分別為86.93％和44.24％。4.添加甘露醇的FA-BSANP-VBLS凍干粉用去離子水復(fù)溶后放于4℃儲(chǔ)存,48 h后可見(jiàn)溶液穩(wěn)定,無(wú)分層或渾濁現(xiàn)象。
　　 5.FA-BSANP-VBLS在最初的12 h內(nèi)藥物傳遞系統(tǒng)出現(xiàn)突釋,之后緩慢釋放至56 h,分別釋放出所含VBLS的30％和80％。軟件擬合發(fā)

7、現(xiàn)該藥物傳遞系統(tǒng)符合一級(jí)釋放動(dòng)力模型,更進(jìn)一步證明了FA-BSANP-VBLS的緩釋特性。
　　 6.FA-BSANP-VBLS的抗癌活性實(shí)驗(yàn)
　　 VBLS原藥組、FA-BSANP-VBLS組和BSANP-VBLS組相比,FA-BSANP-VBLS組細(xì)胞凋亡率最高,且BSANP-VBLS組和FA-BSANP-VBLS組細(xì)胞凋亡圖上均有緩釋特征。
　　 通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,證明本實(shí)驗(yàn)所制備的FA-BSAN-VBLS