多發(fā)性骨髓瘤中C-MYC、HIF-1α及VEGF表達(dá)異常的研究.pdf

1、第一章C-MYC、HIF-1α以及VEGF在MM患者體內(nèi)的表達(dá)及意義
　　目的：探討初發(fā)、化療后緩解、復(fù)發(fā)MM患者體內(nèi)C-MYC、HIF-1α、VEGF的表達(dá)情況及相關(guān)性，為臨床診斷、治療及判斷療效提供新思路。
　　方法：分別收集10例初發(fā)MM患者、10例治療緩解MM患者、10例復(fù)發(fā)MM患者以及10例正常人外周血，提取單個(gè)核細(xì)胞，用RT-PCR檢測(cè)不同組細(xì)胞中C-MYC以及HIF-1α的表達(dá)（讀取CT值，利用2-ΔΔCT進(jìn)行

2、計(jì)算），并對(duì)二者的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；用Western-Blot檢測(cè)不同組細(xì)胞中C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達(dá),（以目的基因與內(nèi)參照β-actin表達(dá)量的比值作為最終結(jié)果）。
　　結(jié)果：C-MYC及HIF-1α在多發(fā)性骨髓瘤患者中的表達(dá)與正常人相比增高，且在初發(fā)組及復(fù)發(fā)組中的表達(dá)高于治療緩解組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，而初發(fā)組與復(fù)發(fā)組統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無明顯差別；C-MYC與HIF-1α具有相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.87

3、7；C-MYC、HIF-1α及VEGF蛋白在多發(fā)性骨髓瘤患者體內(nèi)表達(dá)增高，且三種蛋白在初發(fā)組及復(fù)發(fā)組中的表達(dá)高于治療緩解組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。
　　結(jié)論：與正常人相比，多發(fā)性骨髓瘤患者體內(nèi)的C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達(dá)異常升高，在治療緩解MM患者中的表達(dá)低于初發(fā)MM患者及復(fù)發(fā)MM患者，且C-MYC與HIF-1α二者之間具有相關(guān)性。提示C-MYC與HIF-1α與MM的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步

4、研究。
　　第二章U266細(xì)胞株中C-MYC及HIF-1α關(guān)系的研究
　　目的：探討多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266中C-MYC與HIF-1α的關(guān)系，以及C-MYC/HIF-1α對(duì)VEGF的影響，為臨床治療MM尋找新靶點(diǎn)。
　　方法：用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)分別將沉默C-MYC基因的熒光質(zhì)粒、沉默HIF-1α基因的熒光質(zhì)粒以及空白熒光質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染進(jìn)入U(xiǎn)266細(xì)胞株中，先用共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，其次用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同組細(xì)

5、胞中C-MYC與HIF-1α的表達(dá)（讀取CT值，利用2-ΔΔCT進(jìn)行計(jì)算）；Western-Blot技術(shù)檢測(cè)不同組細(xì)胞中C-MYC、HIF-1α及VEGF蛋白的表達(dá)，（以目的基因與內(nèi)參照β-actin表達(dá)量的比值作為最終結(jié)果）。
　　結(jié)果：與空白對(duì)照組相比，沉默C-MYC基因后C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，沉默HIF-1α基因后HIF-1α及VEGF的表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，

6、P<0.05，C-MYC基因的表達(dá)無明顯下降。
　　結(jié)論：HIF-1α的表達(dá)依賴于C-MYC基因的調(diào)控，且VEGF的合成和分泌依賴于C-MYC/HIF-1α的調(diào)節(jié)，C-MYC/HIF-1α可能成為一個(gè)治療MM的新靶點(diǎn)。
　　第三章甲磺酸氟馬替尼對(duì)U266細(xì)胞株中C-MYC、HIF-1α及VEGF的影響
　　目的：本研究旨在探討新一代酪氨酸激酶抑制劑甲磺酸氟馬替尼對(duì)發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266中C-MYC、HIF-1α及VE

7、GF作用。
　　方法：采用RT-PCR檢測(cè)甲磺酸氟馬替尼(0、1、5、10 umol/L)作用于U266細(xì)胞株8h、16h、24h后C-MYC及HIF-1α的表達(dá)情況（讀取CT值，利用2-ΔΔCT進(jìn)行計(jì)算）；采用Western-blot進(jìn)一步從蛋白水平檢測(cè)甲磺酸氟馬替尼(0、1、5、10 umol/L)作用于人多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞株16h后C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達(dá)情況（目的基因與內(nèi)參照β-actin表達(dá)量的比值

8、作為最終結(jié)果）
　　結(jié)果：C-MYC基因及HIF-1α基因隨著藥物氟馬替尼作用濃度增大，其表達(dá)逐漸降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；在相同濃度的氟馬替尼作用下，隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)其表達(dá)逐漸降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；C-MYC蛋白、HIF-1α蛋白及VEGF蛋白在甲磺酸氟馬替尼作用相同時(shí)間時(shí)，隨著藥物作用濃度的增大，三者表達(dá)均逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）
　　結(jié)論：甲磺酸氟馬替尼