慢病毒介導(dǎo)的HER2-siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應(yīng)顯像研究.pdf

1、碩士學(xué)位論文論文題目慢病毒介導(dǎo)的HER2siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應(yīng)顯像研究研究生姓名吳強(qiáng)樂指導(dǎo)教師姓名石怡珍專業(yè)名稱影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)研究方向腫瘤核醫(yī)學(xué)論文提交日期2013年3月慢病毒介導(dǎo)的HER2siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應(yīng)顯像研究中文摘要I慢病毒介導(dǎo)的HER2siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應(yīng)顯像研究中文摘要目的：的：構(gòu)建針對Her2neu的RNA干擾慢病毒載體，通過體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)觀察HER2表達(dá)受抑制后

2、對卵巢癌細(xì)胞SKOV3生物學(xué)行為的影響，并利用放射性核素131I標(biāo)記針對HER2的單抗Herceptin，SPECT顯像活體監(jiān)測轉(zhuǎn)導(dǎo)HER2siRNA后的干擾效應(yīng)，初步探索SPECT在RNAi生物治療中的應(yīng)用前景。方法：法：①根據(jù)Her2neu基因的cDNA序列，設(shè)計(jì)、構(gòu)建及鑒定三條特異性的HER2siRNA慢病毒表達(dá)載體及一條隨機(jī)序列的陰性對照慢病毒表達(dá)載體。②將上述載體經(jīng)Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中，收獲病

3、毒上清液感染人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，通過RTPCR篩選出干擾效率最高的重組慢病毒表達(dá)載體。③建立穩(wěn)定表達(dá)有效HER2干擾序列的SKOV3細(xì)胞株及陰性對照細(xì)胞株，組成KD1組和NC組，并以未感染的SKOV3細(xì)胞作為CON組，分別通過流式細(xì)胞儀、Westernblot及MTT法檢測各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞HER2的表達(dá)、細(xì)胞凋亡及增殖；④將各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞接種裸鼠，檢測成瘤率、成瘤時(shí)間、瘤體大?。幻庖呓M化測定各實(shí)驗(yàn)組HER2蛋白表達(dá)，并通過SPECT行1

4、31IHerceptin顯像，計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組腫瘤本底（TB）比值。結(jié)果：①成功構(gòu)建三條HER2siRNA干擾序列重組慢病毒表達(dá)載體及陰性對照慢病毒表達(dá)載體，測序證實(shí)序列正確。②重組慢病毒表達(dá)載體感染293T細(xì)胞后，成功獲得了高滴度的病毒液。感染靶細(xì)胞后，通過RTPCR篩選出干擾效率最高的序列HER2siRNA1，其HER2mRNA抑制率為82.7%。③經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)有效干擾序列和陰性對照序列的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株。流式細(xì)胞儀測得KD1組