siRNA抑制人卵巢癌SW626細(xì)胞CXCR4基因的研究.pdf

1、目的：研究應(yīng)用RNA干擾技術(shù)沉默人卵巢癌SW626細(xì)胞趨化因子受體4（CXCR4）基因后，卵巢癌細(xì)胞CXCR4的蛋白表達(dá)情況，對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖活性的影響，推斷其與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后的關(guān)系。
　　 方法：根據(jù)CXCR4基因編碼序列及RNAi寡核苷酸設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)合成兩對(duì)針對(duì)CXCR4基因的siRNA片段和1對(duì)FAM標(biāo)記的陰性對(duì)照siRNA片段，序列經(jīng)BLAST查詢，確定為CXCR4特異性序列，排除與其他基因同源性。實(shí)驗(yàn)分

2、為四個(gè)組：空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)S1組和實(shí)驗(yàn)S2組。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染至卵巢癌SW626細(xì)胞中，熒光顯微鏡觀察檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，采用Western blot檢測(cè)RNA干擾后卵巢癌SW626細(xì)胞CXCR4蛋白的表達(dá)情況。利用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖的情況。
　　 結(jié)果：1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染卵巢癌SW626細(xì)胞48小時(shí)后，熒光顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)當(dāng)卵巢癌細(xì)胞處對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，培養(yǎng)24h后融合度為90％時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染

3、，質(zhì)粒和脂質(zhì)體比例為1：3時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高，發(fā)綠色熒光的細(xì)胞數(shù)可達(dá)到70％以上。
　　 2、轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，用western blot法檢測(cè)，①實(shí)驗(yàn)S1組和S2組與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，卵巢癌SW626細(xì)胞CXCR4/β-actin蛋白表達(dá)水平降低，蛋白表達(dá)明顯受抑制（P<0.05）。②陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較：CXCR4/β-actin蛋白表達(dá)無顯著性差異（P>0.05）。③實(shí)驗(yàn)組S1組和S2組比較：無顯著性差異（P>0

4、.05）。
　　 3、轉(zhuǎn)染24h、48h、72h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，結(jié)果顯示：①實(shí)驗(yàn)S1組和S2組與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，卵巢癌SW626細(xì)胞的增殖受到明顯抑制，各檢測(cè)點(diǎn)OD值顯著升高（P<0.05）。②空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較差異無顯著性意義（P>0.05）。③實(shí)驗(yàn)組S1和S2組比較差異無顯著性意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：應(yīng)用RNA干擾技術(shù)能特異性抑制人卵巢癌細(xì)胞的CXCR4蛋白的表達(dá)和抑制卵