PI3K信號通路對GES-1、BGC-823細(xì)胞系中磷酸化P27蛋白表達(dá)和分布的影響.pdf

1、目的:1、研究P27蛋白及三種磷酸化P27蛋白(p-P27(Thr187)、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10))在GES-1、BGC-823兩細(xì)胞系的表達(dá)及分布差異。2、研究PI3K信號通路在GES-1、BGC-823細(xì)胞系中對P27蛋白、p-P27(Thr187)、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達(dá)及分布的影響。
　　 方法:培養(yǎng)人胃黏膜上皮永生化細(xì)胞系GES-1及人胃癌細(xì)胞系BGC-

2、823,以流式細(xì)胞術(shù)測定各自的細(xì)胞周期分布。以Westernblotting測定兩種細(xì)胞總蛋白、漿蛋白、核蛋白中P27及P-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)、P-P27(Ser10)的含量及分布特點(diǎn)。以PI3K信號通路特異性阻滯劑LY294002處理兩種細(xì)胞系,再以流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期,Westernblotting測定目的蛋白在細(xì)胞總蛋白及核、漿中的表達(dá)及分布。所得結(jié)果輸入SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

3、　　 結(jié)果:
　　 1、對比GES-1、BGC-823兩細(xì)胞系,在細(xì)胞總蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000；P=0.000；P=0.000；P=0.000)。在細(xì)胞漿蛋白中,P27蛋白、P-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001；P=0.000；P=0.000),而P-P27(T

4、hr187)表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.052)。在細(xì)胞核蛋白中,P27蛋白、P-P27(Thr187)、p-P27(Ser10)表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001；P=0.000；P=0.000),而p-P27(Thr157)表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.288)。兩細(xì)胞系周期分布差異明顯(P=0.003)。
　　 2、GES-1細(xì)胞系經(jīng)LY294002作用后,在細(xì)胞總蛋白中,P27蛋白及p-P27(Thr187)、P-P27(

5、Thr157)、P-P27(Ser10)的表達(dá)量變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.651；P=0.482;P=0.357；P=0.070)。在細(xì)胞漿蛋白中,P-P27(Thr187)、P-P27(Ser10)表達(dá)量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.053；P=0.056),而P27蛋白和P-P27(Thr157)表達(dá)量則變化顯著(P=0.013；P=0.002)。在細(xì)胞核蛋白中,P27蛋白及P-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)、P-

6、P27(Ser10)表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.558；P=0.140；P=0.223；P=0.052)。給予處理前后細(xì)胞周期變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.392)。
　　 3、BGC-823細(xì)胞系經(jīng)LY294002作用后,在細(xì)胞總蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表達(dá)量均變化顯著,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000；P=0.001；P=0.000),而p-P27(Thr187)表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)變

7、化(P=0.254)。在細(xì)胞漿蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表達(dá)量變化顯著(P=0.000；P=0.000；P=0.001),而p-P27(Thr187)表達(dá)量無明顯變化(P=0.070)。在細(xì)胞核蛋白中,P27蛋白、P-P27(Ser10)表達(dá)量變化顯著(P=0.001；P=0.001),而P-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)表達(dá)量無明顯變化(P=0.223；P=0.482)

8、。給予處理前后細(xì)胞周期變化顯著(P=0.001)。
　　 4、兩細(xì)胞系同時(shí)經(jīng)LY294002作用后,在細(xì)胞總蛋白中P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.391；P=0.158；P=0.106),僅p-P27(Thr187)表達(dá)差別顯著(P=0.000)。在細(xì)胞漿蛋白中,P27蛋白、P-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.279；P=0.

9、062；P=0.196),僅p-P27(Thr187)表達(dá)差別顯著(P=0.002)。在細(xì)胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.092:P=0.081；P=0.055),僅p-P27(Thr187)表達(dá)差別顯著(P=0.000)。兩組細(xì)胞的周期分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.564)。
　　 結(jié)論:
　　 1、P27蛋白及磷酸化P27蛋白在GES-1細(xì)胞系和BG

10、C-823細(xì)胞系中的表達(dá)水平和核漿分布規(guī)律不同。
　　 2、阻斷PI3K信號通路對GES-1細(xì)胞系中P27蛋白及磷酸化P27蛋白的表達(dá)水平和核漿分布影響不大,也不會對其細(xì)胞周期產(chǎn)生擾亂。
　　 3、阻斷PI3K信號通路可增加BGC-823細(xì)胞系中P27蛋白表達(dá)量,減低磷酸化P27蛋白的表達(dá)量,并可影響細(xì)胞周期的分布,使其接近正常細(xì)胞。
　　 4、PI3K信號通路主要通過改變P27蛋白的核漿分布,促進(jìn)其在胞漿定位而