丹參素對肝星狀細胞中PI3-K-Akt信號通路的影響.pdf

1、目的：分離獲取高產(chǎn)量、高活性、高純度的肝星狀細胞。 方法：用原位循環(huán)灌流法，密度梯度離心法分離純化大鼠的肝星狀細胞，用含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞并傳代。 結果：肝星狀細胞得率為3×107個/鼠，純度大于97％，存活率大于92％。 結論：分離出的大鼠肝星狀細胞產(chǎn)量高、活性好、純度高。 目的：研究丹參素對肝星狀細胞蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表達的影響，探討丹參素抗肝纖維化的

2、機制。 方法：采用原位循環(huán)灌流法提取Wistar大鼠的肝星狀細胞，在肝星狀細胞培養(yǎng)板內(nèi)分別加入不同濃度的丹參素和渥曼青霉素在體外培養(yǎng)24小時后，用MTT法觀察丹參素以及渥曼青霉素對肝星狀細胞增殖的抑制作用。用流式細胞儀觀察丹參素和渥曼青霉素對肝星狀細胞周期的影響。Western Blot方法檢測不同濃度丹參素和渥曼青霉素作用后的肝星狀細胞中Akt和p-Akt的表達情況。 結果：MTT檢測表明濃度為0.0625mmol/L

3、，0.125mmol/L，0.25mmol/L的丹參素對肝星狀細胞增殖的抑制作用依次增強，濃度為20nmol/L，40 nmol/L，60 nmol/L，的渥曼青霉素對肝星狀細胞增殖的抑制作用也依次增強。流式細胞儀檢測結果顯示丹參素和渥曼青霉素使G1期肝星狀細胞增多，S期肝星狀細胞減少，肝星狀細胞停滯于G1期。Western blot檢測出丹參素和渥曼青霉素對肝星狀細胞中Akt蛋白的表達沒有明顯影響，但是不同濃度的丹參素和渥曼青霉素作用