雷公藤紅素對(duì)P物質(zhì)致敏肥大細(xì)胞中PI3K-AKT-GSK3β信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：以經(jīng)P物質(zhì)致敏的肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815為模型，檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)其細(xì)胞活性的影響，并分析PI3K/AKT/GSK3β通路上關(guān)鍵基因和蛋白表達(dá)量變化，從而為深入揭示雷公藤紅素在抗炎和抗過(guò)敏中的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：以肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815為研究對(duì)象，通過(guò)基于CCK8方法的細(xì)胞活力檢測(cè)，確定最佳的P物質(zhì)處理濃度和時(shí)間，構(gòu)建致敏模型;采用同樣的方法，篩選出合適的雷公藤紅素處理濃度和時(shí)間。在此基礎(chǔ)上，檢測(cè)不同濃度和時(shí)間的雷公藤

2、紅素干預(yù)對(duì)致敏細(xì)胞活性的影響。以無(wú)雷公藤處理的P物質(zhì)模型組為對(duì)照，采用qPCR法檢測(cè)雷公藤紅素干預(yù)組中PI3K/AKT/GSK3β信號(hào)通路的主要基因的相對(duì)表達(dá)量;同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)該信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白AKT2和GSK3β的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴對(duì)于單純的P物質(zhì)處理組，在50-150μM處理濃度下，細(xì)胞存活率隨時(shí)間增加而下降;其中100μM處理1h后細(xì)胞的存活率即降低為51.58％，確定為最佳的致敏條件。對(duì)于單純的雷公藤紅素組，當(dāng)干

3、預(yù)濃度超過(guò)2.5μM、時(shí)間超過(guò)1h后，細(xì)胞存活率明顯隨濃度增加和/或時(shí)間延長(zhǎng)而降低;而濃度在2μM、時(shí)間在1h內(nèi)，細(xì)胞存活率未受明顯影響(P＞0.05)，因此是雷公藤紅素的合適干預(yù)條件范圍。⑵選擇100μM P物質(zhì)致敏造模，并采用1.5μM、2.0μM、2.5μM的雷公藤紅素分別干預(yù)0.5h、1.0h和1.5h;中劑量即2.0μM組雷公藤組干預(yù)后細(xì)胞存活率分別變成91.90％(0.5h)、83.51％(1.0h)和82.4％(1.5h)

4、，均顯著高于對(duì)應(yīng)的P物質(zhì)組(P＜0.05)，證明在此濃度下具有良好的干預(yù)發(fā)揮效應(yīng)。⑶選擇2.0μM雷公藤紅素干預(yù)0.5h體系，與無(wú)雷公藤干預(yù)組即P物質(zhì)模型組相比，該干預(yù)組中Ccl24、Gnai1、Pik3r3、Akt2、Fgr、 Arrb2基因的相對(duì)表達(dá)量均有不同程度的顯著下降(P＜0.05); Adrbk2、Gsk3β、Ccr6基因的相對(duì)表達(dá)量則均呈現(xiàn)一定程度的顯著上升(P＜0.05)，表明此雷公藤紅素干預(yù)會(huì)影響致敏肥大細(xì)胞中PI3K