PI3K-AKT-mTOR信號通路對Foxp3基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究不同劑量雷帕霉素對小鼠體內(nèi)Treg細(xì)胞的影響;探討不同劑量雷帕霉素對Foxp3基因表達(dá)及mTOR活化的影響,進(jìn)一步分析Foxp3基因表達(dá)程度與PI3K-AKT-mTOR信號通路的激活程度是否具有相關(guān)性,為探索RAPA誘導(dǎo)Foxp3基因表達(dá)的具體機(jī)制提供一條新的思路。
　　方法：將SPF級昆明系小鼠60只隨機(jī)分為對照組(A)和實(shí)驗(yàn)組(B、C、D),B、C、D三組分別灌胃雷帕霉素0.2mg·d-1、0.4mg·d-1、0.6

2、mg·d-1,A組每天予以無菌水灌胃,共3周。3周后,無菌條件下心臟采血,EDTA抗凝,分離脾臟,制備單細(xì)胞懸液,采用流式細(xì)胞儀檢測小鼠外周血和脾臟中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平(CD4+CD25+Treg細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比),RT-PCR檢測小鼠脾細(xì)胞Foxp3mRNA的表達(dá),免疫組織化學(xué)SP法染色觀察小鼠脾臟中p-mTOR蛋白表達(dá)的變化,并利用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)測量各實(shí)驗(yàn)組及對照組中p-mTOR蛋白表達(dá)的平均光密度。

3、
　　結(jié)果：1實(shí)驗(yàn)組(B、C、D)小鼠外周血和脾細(xì)胞中CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平分別為(9.62±1.43、13.76±1.97、15.41±2.45)％和(12.23±4.56、23.03±6.18、25.17±6.42)%,對照組(A)小鼠外周血和脾細(xì)胞中CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平分別為(3.52±0.65)%和(6.53±3.01)%,無論是在外周血還是脾細(xì)胞中,B、C、D組CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平

4、明顯高于A組(P<0.05),C、D組與B組之間CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平也有明顯差異性(P<0.05),C組和D組之間CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平無明顯差異性(P>0.05)。
　　2Foxp3mRNA在實(shí)驗(yàn)組(B、C、D)小鼠脾臟中表達(dá)的程度分別為(0.4853±0.0574、0.7886±0.1085、0.9639±0.2015),明顯高于對照組A(0.1345±0.0271)(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組(B、C、

5、D)小鼠脾臟中p-mTOR蛋白表達(dá)的平均光密度分別為(0.2326±0.0431、0.1156±0.0223、0.0556±0.0041),明顯低于對照組A(0.4223±0.0534)(P<0.05);兩指標(biāo)經(jīng)pearson相關(guān)分析,小鼠脾臟中Foxp3mRNA的表達(dá)與p-mTOR蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：1雷帕霉素能夠誘導(dǎo)昆明系小鼠體內(nèi)CD4+CD25+Treg細(xì)胞增殖,其使用劑量可以影響CD4+CD25+Treg細(xì)胞的增