促紅細胞生成素對離體幼兔缺血再灌注損傷心肌中PI3-K-AKT信號通路的影響.pdf

1、目的：
　　 心肌缺血再灌注損傷是臨床實踐中常見的組織器官損傷,其準確機制仍不十分清楚。研究表明多種生長因子對心臟均有保護作用,使其免受局部缺血及其他損傷帶來的損害。雖然這些心肌保護因子的轉導通路很復雜,但在很多情況下,抗細胞凋亡是它們的一個共同特征,PI3-K(phosphatidylinositol 3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶)-AKT(v-akt murine thymoma viral oncogene hom

2、olog,蛋白激酶B)信號轉導途徑是細胞內重要的信號轉導通路,在細胞的凋亡、存活、增殖以及細胞骨架的變化等活動中發(fā)揮重要的生物學功能,其中尤為重要的是它對細胞凋亡、存活的調節(jié)作用。近年來,對心肌缺血再灌注損傷機制的研究日益深入,對未成熟心肌保護的認識進一步加深,提出了一些新的保護策略。其中,促紅細胞生成素(Erythropoietin EPO)的心肌保護作用引起了人們的關注。本研究通過前期實驗證實了EPO預處理可明顯減輕心肌缺血再灌注損

3、傷,對未成熟心肌具有一定的心肌保護作用,且用量以5000U/kg效果最顯著。本實驗應用Langendorff離體幼兔心臟工作模型,探討EPO注射液對未成熟心肌缺血再灌注損傷的保護作用與PI3-K/AKT信號轉導途徑的關系。
　　 材料與方法
　　 出生14～21d的日本長耳大白兔30只,體重250±50g,雌雄不拘,中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院動物實驗中心提供。30只日本大耳白幼兔隨機分為對照組與EPO 預處理組,每組15只

4、。在模型建立前24小時,EPO 組用生理鹽水將 EPO5000U/Kg稀釋成2ml經(jīng)腹腔注射,對照組經(jīng)腹腔注射2ml生理鹽水。實驗時幼兔腹腔注射5％水合氯醛麻醉,耳緣靜脈注射肝素鈉500U抗凝。胸正中切口開胸并迅速取出心臟,立即浸入4℃生理鹽水中,經(jīng)主動脈插管以后連接于Langendorff離體心臟灌注裝置上,以37℃K-H液進行灌注,灌注壓恒定為70cmH2O。經(jīng)15min的自然灌流平衡后,對照組及EPO組均用4℃St.ThomasⅡ

5、停搏液進行停搏。兩組心臟均停搏30min后,以37℃K-H液再灌注至復跳后120min。實驗結束后留取部分左心室心肌于-70℃冰箱冰凍保存,待全部實驗結束后將心肌組織取出,解凍,制成石蠟切片,應用免疫組化方法檢測心肌缺血再灌注120min后PI3-K、AKT及caspase9表達,并用TUNNEL法檢測心肌細胞凋亡。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理,計量資料以均數(shù)±標準差((x)±s)表示,組間比較采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析,兩

6、兩比較用多重比較t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1、心肌組織PI3-K、AKT的表達變化:對照組缺血再灌注120min后PI3-K、AKT基本無表達,EPO組缺血再灌注120min后的PI3-K及AKT表達明顯增多。
　　 2、caspase9的表達變化:EPO組缺血再灌注120min后的caspase9基本無表達,對照組缺血再灌注后的caspase9表達明顯增多。
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