2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)是世界上第四大的糧食作物,薯片和薯條等油炸加工是馬鈴薯加工的重要組成部分。馬鈴薯在低溫貯藏條件下,其塊莖會出現(xiàn)還原糖累積的低溫糖化現(xiàn)象。低溫糖化后的馬鈴薯塊莖在高溫油炸加工的過程中,油炸產(chǎn)品會變黑并產(chǎn)生苦味物質(zhì),生成潛在的致癌物質(zhì)丙烯酰胺。降低低溫下塊莖中還原糖的累積無疑是防治該現(xiàn)象產(chǎn)生的有效途徑。前人研究表明,轉(zhuǎn)化酶在低溫糖化過程中起著至關重要的作用,而且轉(zhuǎn)化酶及其抑制子與SbSnRK

2、1可能形成新的蛋白復合物StvacINV1-StInvInh2B-SbSnRK1,對轉(zhuǎn)化酶進行精細調(diào)控。但StvacINV1-StInvInh2B-SbSnRK1蛋白質(zhì)復合體在植物體內(nèi)的亞細胞定位、SbSnRK1α的磷酸化位點、以及SbSnRK1α的轉(zhuǎn)錄水平的變化是否會導致其蛋白質(zhì)磷酸化水平的變化等都還不明確。同時,亞基SbSnRK1β在植物體內(nèi)是否也具有對轉(zhuǎn)化酶活性調(diào)控的功能也不得而知。為此,本研究分別從上述問題入手,進一步探究了Sn

3、RK1-StvacINV1-StInvInh2B復合體對轉(zhuǎn)化酶活性的調(diào)控作用。主要結(jié)果如下:
  1.為了研究StvacINV1-StInvInh2B-SbSnRK1蛋白質(zhì)復合體的亞細胞定位,分別構(gòu)建了不同目標基因融合紅色熒光蛋白的植物表達載體RFP-SbSnRK1α、RFP-SbSnRK1β、StvacINV1-RFP、StInvInh2B-RFP和液泡膜標記基因融合綠色熒光蛋白的載體AtγTIP-GFP,并通過農(nóng)桿菌介導的方式

4、,將目標基因與標記基因共表達。結(jié)果顯示,SbSnRK1α、SbSnRK1β主要定位在液泡膜上,StInvInh2B在液泡膜和液泡中均有分布,StvacINV1則主要分布在液泡中。這些結(jié)果說明,SbSnRK1在液泡膜或液泡內(nèi)與轉(zhuǎn)化酶及其抑制子形成了一個復合體SbSnRK1-StvacINV1-StInvInh2B,從而實現(xiàn)低溫條件下對馬鈴薯塊莖轉(zhuǎn)化酶活性的調(diào)控。
  2.通過定點突變的方法,成功構(gòu)建了SbSnRK1α的三個突變體:S

5、bSnRK1αT175A/S176A、SbSnRK1αT175A、SbSnRK1αS176A,經(jīng)過體外表達,獲得了純化的相應蛋白質(zhì),并在體外對這些突變體蛋白的活性進行了測定。結(jié)果顯示,SbSnRK1α的175位蘇氨酸突變后,不能被上游激酶磷酸化,從而不能影響StvacINV1的活性,而當SbSnRK1α的176位絲氨酸突變后,仍對StvacINV1活性具有調(diào)控作用,這說明第175位蘇氨酸為SbSnRK1α磷酸化位點。利用SbSnRK1α

6、 T175位點的磷酸化特異抗體,對轉(zhuǎn)基因株系塊莖在低溫貯藏后的磷酸化水平進行半定量檢測,結(jié)果顯示,SbSnRK1α超量的轉(zhuǎn)基因株系的磷酸化水平明顯高于對照品種鄂馬鈴薯3號;而干涉的轉(zhuǎn)基因株系中,塊莖的磷酸化水平幾乎很難檢測到。這些結(jié)果表明,低溫貯藏后塊莖中SbSnRK1α的磷酸化水平與其轉(zhuǎn)錄豐度成正比,且磷酸化水平的高低可能直接影響了低溫條件下塊莖中轉(zhuǎn)化酶的活性。
  3.為了研究亞基SbSnRK1β在馬鈴薯低溫糖化過程中的功能,

7、本研究分別構(gòu)建了SbSnRK1β的干涉和超量表達載體,分別轉(zhuǎn)化鄂馬鈴薯3號和AC142,通過篩選獲得了超量和干涉效果較好的株系。干涉轉(zhuǎn)基因株系相關指標測定結(jié)果表明,4℃低溫貯藏30天后,塊莖的轉(zhuǎn)化酶活性與對照相比略有降低,而還原糖的含量與對照相比差異不明顯。由此推測,雖然SbSnRK1β表達降低后,轉(zhuǎn)化酶活性會略微降低,但活性的改變還不足以影響低溫貯藏后塊莖中還原糖的累積,這可能是由于SbSnRK1β被干涉后,其同源基因產(chǎn)生了功能互補的

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