冠心平對(duì)ApoE---小鼠動(dòng)脈粥樣硬化抗炎作用的研究.pdf

1、從上世紀(jì)末至本世紀(jì)初開始，因科學(xué)的進(jìn)步以及醫(yī)藥衛(wèi)生的普及，人類平均壽命較前延長，但因?yàn)樯鐣?huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、飲食結(jié)構(gòu)的改變、精神層面影響等因素，高血壓、高脂血癥、糖尿病、吸煙、肥胖、飲食、感染、遺傳因素和一些致繼發(fā)性疾病如高胰島素血癥等已被醫(yī)學(xué)界公認(rèn)為最影響人類健康的危險(xiǎn)因素。其中，動(dòng)脈粥樣硬化是這些健康問題背后直接或間接的導(dǎo)火線。動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種慢性、進(jìn)展性、系統(tǒng)性的炎癥疾病，是以血管平滑肌細(xì)胞增生

2、和脂質(zhì)在粥樣硬化斑塊沉積為特征的疾病，是腦血管病發(fā)生的危險(xiǎn)因素，更是心腦血管病的主要病理基礎(chǔ)。AS是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的一種，更是屬于冠心病的范疇。
　　論文分為四部分。遵循學(xué)術(shù)探討的必要過程，第一部分先從病名開始。由于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中沒有動(dòng)脈粥樣硬化這一病名，追溯中醫(yī)的發(fā)展與沿革，可發(fā)現(xiàn)胸痹心痛是動(dòng)脈粥樣硬化最為相近的病名。從大量文獻(xiàn)查找與對(duì)比中，可印證胸痹心痛無論在發(fā)生、發(fā)展、癥候、特性以及預(yù)后等方方面面，均與動(dòng)脈粥樣硬化非常類似。第

3、二部分屬于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)范疇，從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的理論部分開始，從大量研究文獻(xiàn)中概括了動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生與發(fā)展的機(jī)制，并從細(xì)胞分子水平探討了相關(guān)關(guān)鍵性炎性指標(biāo)，再通過小鼠實(shí)驗(yàn)，觀察了冠心平在干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)數(shù)個(gè)關(guān)鍵性炎癥指標(biāo)，并通過這些指標(biāo)的客觀數(shù)據(jù)，顯示冠心平對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的調(diào)控與效能。第三部分是在前面探討的基礎(chǔ)上，從中醫(yī)角度對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化作進(jìn)一步的闡述。動(dòng)脈粥樣硬化從中醫(yī)的角度理解，既可以是病，也可以是證（與癥）。歷代文獻(xiàn)以及近代研究顯示，動(dòng)脈粥

4、樣硬化發(fā)生的機(jī)理不外乎中醫(yī)概念的:膏、脂、痰（濁）、血瘀，其中更有文獻(xiàn)提出熱、毒（濁）等理論。此一部分的討論也結(jié)合了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)中醫(yī)病因、病機(jī)、治法、方藥的相互解釋。第四部分綜述了冠心平的臨床及實(shí)驗(yàn)研究，并且也通過中醫(yī)的病因病機(jī)、治法方藥，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)從分子水平，揭示了冠心平對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的正面調(diào)控與效能。
　　第一部分為胸痹心痛的病名、病因病機(jī)、辨證特點(diǎn)、方藥治療及證治學(xué)術(shù)沿革。其中包括胸痹心痛的概念、歷代醫(yī)家的論述、按照朝代沿革

5、之順序，從先秦、兩漢、晉、唐、宋、金、元、明、清，及至近代，闡述中醫(yī)診治胸痹心痛的理論學(xué)說、理方法藥以及在臨床經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上形成不同的流派。這是探討學(xué)術(shù)發(fā)展的之必須過程與鋪墊。通過總結(jié)整理前人的學(xué)說觀點(diǎn)以及學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)積累的基礎(chǔ)上，能夠較全面展現(xiàn)中醫(yī)學(xué)對(duì)胸痹心痛的認(rèn)識(shí)。此為:知其由來，審其變遷，方能承前啟后。大量文獻(xiàn)的整理、歸類于發(fā)掘，其來源主要通過檢索關(guān)于“胸痹”、“心痛”、“真心痛”、“心悸”等文獻(xiàn)檢索，并以中醫(yī)古籍原著:《中華醫(yī)典》為主要

6、依據(jù)。關(guān)于冠心病，心絞痛，心律失常等文獻(xiàn)檢索，主要來源于《中文科技期刊數(shù)據(jù)庫（維普期刊數(shù)據(jù)庫）》。其它資料來源于:中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)光盤數(shù)據(jù)庫(CBM)。當(dāng)代有關(guān)胸痹心痛相的有關(guān)資料則通過手工檢索?，F(xiàn)代中醫(yī)診治胸痹心痛理論學(xué)說以及辨證分型，則源自于行業(yè)頒布的標(biāo)準(zhǔn)或有關(guān)教材。
　　第二部分主要分為實(shí)驗(yàn)研究以及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的細(xì)胞分子水平理論探討。理論探索主要圍繞著各種與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展、調(diào)節(jié)密切相關(guān)的細(xì)胞因子，其中以炎癥

7、因子為主軸，以脂質(zhì)調(diào)節(jié)因子、斑塊穩(wěn)定性因子（如金屬基質(zhì)鐵蛋白酶等）、免疫因子等細(xì)胞因子圍繞主要炎癥因子展開討論，討論中涵蓋相關(guān)的細(xì)胞通路機(jī)制以及基因轉(zhuǎn)錄機(jī)制等。文中搜集了大量近代科研專家及學(xué)者相關(guān)的研究報(bào)告與文獻(xiàn)，并擬以白細(xì)胞介素IL-1Ra、IL-1β、IL-10以及ox-LDL為實(shí)驗(yàn)的研究指標(biāo)。
　　實(shí)驗(yàn)研究包括實(shí)驗(yàn)的配備條件、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)操作部分、數(shù)據(jù)分析、病理圖片以及結(jié)果討論。方法:40只ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為:1）

8、空白對(duì)照組（正常飼養(yǎng)）8只，2）模型組（高脂飼養(yǎng)）8只，3）冠心平組（8.38 g·kg-1·d-1）8只，4）立普妥（阿托伐他汀鈣片）組(8.38g·kg-1·d-1)8只，5）冠心平片加立普妥（阿托伐他汀鈣片）組(16.75g·kg-1·d-1)8只，共5組。除對(duì)照組之外，其余四組均高脂飼養(yǎng)。具體操作為，正常組為基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其余組為高脂飼料飼養(yǎng)。除正常組與模型外，立普妥組、冠心平組、冠心平加立普妥組高脂飼料喂養(yǎng)8周后，給予相應(yīng)的藥

9、物，正常組、模型組則于8周后給予等量蒸餾水灌胃。立普妥組、冠心平組、冠心平組與立普妥組分別將藥物溶解于蒸餾水中灌胃，灌胃容積量按0.1ml/10g計(jì)算，每日一次，共1月。每周稱重一次，記錄體重。末次給藥后，禁食不禁水12h，然后動(dòng)物眼眶靜脈取血，2000rpm，10min，分離血清，備用。取抗凝血，備檢測。隨即將每只ApoE-/-小鼠脫頸椎處死動(dòng)物，解剖，取完整主動(dòng)脈，生理鹽水沖洗后放入福爾馬林溶液中，用手術(shù)剪沿胸部正中線剪開皮膚直至腹

10、部，剪開胸腔，剪去胸骨，暴露心臟，沿脊椎前沿尋找主動(dòng)脈，分離主動(dòng)脈，用手術(shù)剪剪下主動(dòng)脈，置于10％中性緩沖福爾馬林中固定8～12h，用作光鏡觀察。石蠟包埋用于常規(guī)病理檢查;另取一部分血管，冰凍切片，采用蘇木精-伊紅(HE)染色檢測主動(dòng)脈病理改變。檢測所有組別各項(xiàng)指標(biāo)1次。即:IL-1β、IL-1Ra、IL-10、ox-LDL:檢測血清中氧化性指標(biāo)ox-LDL的含量，具體根據(jù)試劑說明書操作，檢測血清中促炎細(xì)胞因子IL-1β、ox-LDL，

11、抗炎細(xì)胞因子IL-10、IL-1Ra的含量，具體根據(jù)試劑說明書操作。討論:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示IL-1β、IL-1Ra、IL-10、ox-LDL各項(xiàng)指標(biāo)在藥物干預(yù)下，各有一定的抑制促炎癥及促抗炎癥發(fā)生的效果，并且中西藥合并使用的效果最佳。效能方面，三組比值:IL-1Ra/IL-1β、IL-10/ox-LDL、IL-1Ra/ox-LDL表現(xiàn)各有側(cè)重。IL-1Ra/IL-1β比值顯示立普妥加冠心平的促進(jìn)抗炎（IL-1Ra）與抑制促炎(IL-1β)的

12、炎癥效能顯著;IL-10/ox-LDL比值則顯示冠心平組的顯著效果，說明冠心平對(duì)促進(jìn)抗炎(IL-10)與降脂(ox-LDL)有一定的推進(jìn)作用;IL-1Ra/ox-LDL比值則顯示立普妥效果顯著，說明其抗炎(IL-1Ra)與抑制脂質(zhì)((0)x-LDL)有明確作用。本實(shí)驗(yàn)中沒有顯著差異性(P＞0.05)的某些檢測數(shù)據(jù)可能與小鼠個(gè)體差異性、藥物反應(yīng)以及小鼠的高脂攝取量（高脂飼料）等因素有關(guān)。結(jié)果:綜合以上結(jié)果發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈粥樣硬化ApoE-/-小

13、鼠對(duì)于不同組合的藥物對(duì)不同指標(biāo)產(chǎn)生不同反應(yīng)。其中立普妥加冠心平組較單用藥組效果顯著。立普妥在IL-1Ra水平方面效果較冠心平佳，而冠心平則在抑制IL-1β以及0x-LDL水平上表現(xiàn)比立普妥顯著，在促進(jìn)IL-10的效果上也同樣優(yōu)于立普妥。其較強(qiáng)的調(diào)降脂質(zhì)能力與調(diào)節(jié)炎癥因子效果或許與其多靶向作用有關(guān)，能夠通過其他通路機(jī)制提高機(jī)體的代謝能力與改善機(jī)體免疫力。
　　第三部分主要探討中醫(yī)對(duì)有關(guān)動(dòng)脈粥樣硬化的觀點(diǎn)，以及結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的各項(xiàng)炎癥指

14、標(biāo)，從細(xì)胞分子水平了解中醫(yī)處方用藥在此水平的影響與作用。古代醫(yī)學(xué)雖然沒有“動(dòng)脈硬化”之病名，但已認(rèn)識(shí)到眩暈、頭痛、耳鳴、失眠、健忘、胸痹、脫疽、中風(fēng)等病似有共同的病因。從中醫(yī)角度“心主血脈”“心為君主之官”對(duì)心有推動(dòng)血液循環(huán)作用的基礎(chǔ)而言。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生主要是年老體虛或先天稟賦不足，心主血脈功能失調(diào)，血脈不充，心脈失養(yǎng)。血脈瘀阻，痰瘀互結(jié)，心脈通行受阻等引起，并且復(fù)又飲食失調(diào)、情志內(nèi)傷、嗜煙喜酒等均可誘發(fā)或加重本病。中醫(yī)認(rèn)為AS以虛

15、為主，為本虛標(biāo)實(shí)證。歸納其主要病因病機(jī)不外乎內(nèi)、外二因致虛兩條途徑。動(dòng)脈粥樣硬化主要發(fā)生在血脈，而病理產(chǎn)物則不外乎痰濕與瘀血，以致痰瘀互結(jié)、痹阻心絡(luò)。年老體虛或先天稟賦不足者。年老體虛，血脈不充，心脈失養(yǎng)，血脈瘀阻，痰瘀互結(jié)，血脈通行不暢導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化;先天稟賦不足，則氣血化生乏源，氣虛則運(yùn)血無力，血虛則脈道失養(yǎng)，氣滯血瘀，脈失通利，則易于粥樣斑塊的形成。在此基礎(chǔ)上復(fù)加外界環(huán)境、情志內(nèi)傷、飲食失調(diào)等均可誘發(fā)或加重本病。
　　第四

16、部分主要探討益氣滋陰、活血化痰的中成藥冠心平對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化產(chǎn)生的調(diào)節(jié)作用。其中主要參考李七一教授結(jié)合臨床治療經(jīng)驗(yàn)以及多年實(shí)驗(yàn)研究的成果，對(duì)冠心平治療動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥因子調(diào)節(jié)以及調(diào)脂降脂效果進(jìn)行探討。從各項(xiàng)炎癥、脂質(zhì)因子對(duì)冠心平的干預(yù)效果，總結(jié)出冠心平對(duì)胸痹心痛、痰瘀互阻、高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等病癥（證）的有效調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示了與李七一教授的研究結(jié)論相一致。
　　最后總結(jié)出現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所認(rèn)識(shí)的冠心病動(dòng)脈粥樣硬化，相若于