抗ApoB-100抗體抑制apoE---小鼠動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展.pdf

1、目的：研究抗apoB-100抗體抑制apoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)展的可能機(jī)制—抑制炎癥反應(yīng)和促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　方法：雄性6周齡C57BL/6J背景的apoE-/-小鼠隨機(jī)分成四組，每周檢測(cè)小鼠體重變化。7周齡開始每3周分別給予弗氏佐劑(F-Adjuvant)、弗氏佐劑+apoB-100抗原肽段、牛血清白蛋白（BSA）、apoB-100抗體干預(yù)，22周齡時(shí)結(jié)束干預(yù)。干預(yù)過程中自7周齡開始每隔3周采取小鼠眼眶靜脈血EL

2、ISA法測(cè)試apoB-100抗體滴度。干預(yù)結(jié)束后采集血液標(biāo)本，分離肝臟、心臟及主動(dòng)脈并在-80℃液氮中凍存；檢測(cè)血清炎癥因子IL-6、TNFα、CRP、MCP-1濃度及血脂TG、TC、HDL、LDL濃度；分離出單個(gè)核細(xì)胞用于RT-PCR法檢測(cè) PPARα、ABCG1、ACTA、SR-BI、NF-κB及CD36的基因表達(dá)和用于EMSA法檢測(cè)PPARα及NF-κB的活性。Western法檢測(cè)ACAT、ABCA1、ABCG1、NF-κB、CD

3、36的蛋白表達(dá)情況。油紅O染色檢測(cè)主動(dòng)脈中動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積占主動(dòng)脈面積的百分比。將心臟制作冰凍切片后行油紅O、CD68、mason染色，分別計(jì)算各自的面積及面積百分比。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD35和CD68的表達(dá)。
　　結(jié)果：干預(yù)結(jié)束時(shí)小鼠體重有明顯增加，但各組間小鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各組小鼠apoB-100抗體滴度均有增加，但apoB-100抗原組及apoB-100抗體組與弗氏佐劑組和牛血清白蛋白組相比，小鼠 apoB-100抗體

4、滴度開始增加時(shí)間較早且濃度明顯較高。主動(dòng)免疫干預(yù)和被動(dòng)免疫干預(yù)對(duì)apoE-/-小鼠血清TC和血清LDL均無顯著影響；主動(dòng)脈免疫干預(yù)較被動(dòng)免疫干預(yù)能降低血清TG和增加血清HDL濃度。免疫干預(yù)能夠降低apoE-/-小鼠的血清炎癥因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、MCP-1，并且主動(dòng)免疫干預(yù)比被動(dòng)免疫干預(yù)降低血清炎癥因子的作用更加明顯。主動(dòng)免疫干預(yù)和被動(dòng)免疫干預(yù)均能使炎癥因子NF-κB、膽固醇受體CD36基因和蛋白水平降低而膽固醇代謝相

5、關(guān)因子SR-BI、ABCG1、ACAT1、PPARα的均增高。EMSA法檢測(cè)結(jié)果顯示：免疫干預(yù)后核蛋白PPARα活性增加，而NF-kB活性降低。油紅O染色表明免疫干預(yù)組與對(duì)照組相比動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與動(dòng)脈面積百分比有明顯下降，主動(dòng)脈竇斑塊面積也明顯下降。免疫組化結(jié)果顯示免疫干預(yù)組與對(duì)照組相比斑塊中巨噬細(xì)胞均明顯下降而膠原蛋白均明顯增多。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示免疫干預(yù)組與對(duì)照組相比，脾細(xì)胞中表達(dá) CD68+CD64+（Fc受體）的單個(gè)核細(xì)胞

6、有顯著性增多，表達(dá)CD68+CD35+（CR受體）的單個(gè)核細(xì)胞顯著性減少。
　　結(jié)論：1、抗apoB-100抗體可以抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，降低斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量；2、抗apoB-100抗體能促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)代謝和抑制機(jī)體的炎癥反應(yīng)；3、抗apoB-100抗體可能是由于抑制了巨噬細(xì)胞對(duì)ox-LDL的抗原題呈和抑制了通過CD36受體對(duì)oxLDL的不飽和吞噬，從而避免激活炎癥反應(yīng)和增強(qiáng)巨噬細(xì)胞Fc受體調(diào)理作用，