胰島素生長(zhǎng)因子1對(duì)大鼠心肌細(xì)胞BTEB、SP1基因表達(dá)調(diào)控及相關(guān)抗凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]
　　 隨著年齡的增長(zhǎng),人的心臟功能呈衰退趨勢(shì),心肌細(xì)胞逐漸減少,心肌細(xì)胞凋亡是心肌細(xì)胞減少的主要原因。胰島素生長(zhǎng)因子1(Insulin like growthfactor-1:IGF-1)可以保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡,IGF-1對(duì)于心肌細(xì)胞的保護(hù)能力和在對(duì)抗心肌細(xì)胞凋亡方面的卓越表現(xiàn),使其成為一個(gè)非常有吸引力的和臨床應(yīng)用潛力的心臟保護(hù)類藥物,但是對(duì)于其作用機(jī)制認(rèn)識(shí)的不足是IGF-1作為心臟保護(hù)類藥物應(yīng)用于臨床的主要障礙。本

2、研究的目的在于揭示IGF-1保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡的新的作用機(jī)制,為IGF-1作為心臟保護(hù)類藥物應(yīng)用于臨床打下基礎(chǔ)。
　　 [方法]
　　 首先,利用反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光實(shí)時(shí)定量。PCR法及westemblot法觀察IGF-1對(duì)大鼠心肌細(xì)胞系H9C2中BTEB、SP1 mRNA水平和蛋白水平的影響;其次,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)下調(diào)BTEB基因表達(dá)后心肌細(xì)胞凋亡情況的變化,caspase-3酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)caspase-3酶活

3、性的變化,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率的變化:最后,用反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光實(shí)時(shí)定量PCR法及westemblot法觀察加入PI3/Akt通路抑制劑LY294002后BTEB mRNA水平及蛋白水平的變化。
　　 [結(jié)果]加入IGF-1后,BTEB無(wú)論是在mRNA水平還是蛋白水平上的表達(dá)都下降,而轉(zhuǎn)錄因子SP1的表達(dá)沒(méi)有變化;利用siRNA干擾技術(shù)下調(diào)BTEB基因表達(dá)后,心肌細(xì)胞的凋亡情況得到改善,細(xì)胞存活率增加,類似IGF-1抗凋亡