固氮斯氏假單胞菌A1501亞硝酸還原酶編碼基因nirS的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文固氮斯氏假單胞菌A1501亞硝酸還原酶編碼基因nirS的研究姓名：王麗英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：平淑珍20050601AbstractDenitrificationbyprokaryotesisa11importantpartoftheglobalnitrogencyclePseudomonassm拉eHA1501wasisolatedfromricepaddiesintheSOUth∞are

2、aofChinaBacterialdenitriflcationiSexpressedinresponsetothesingaloflowoxygentensionInthisstody，wepresentphysiologicalandmoleculardataondenitrificatiOninPseudomonasstutzeriAl501ThennirSwasclonedintopSUP202suicideplasmidvec

3、torwhichwascapableofconjugalselftransfertOawidevarietyofGramnegativebacteriaThenkmlacZ丘agmentfrompKOK5wasintroducedintotheencodedregionofnirSandnirSKmLacZfusionplasmid(pSUP202TCKlwasconstructedThentherecombinantplasmidwa

4、s缸ansferedintothewildtypestrainA1501bytriparentalmatingassayandthenitsmutant(M31WasobtainedbyinsertionofthebmcassetteintothegenomebyhomologousrecombinationinthehostgenomeDenitrificationbetweennirSmutantandwildtypeAl501ha

5、ddistinctdifferenceWhennitratewasusedasterminalelectronacceptordenitriflcationabilitydiscreasedWhennitritewasusedasterminalelectronacceptorwhenwildtypeAl501andnirSmutantwereincubated10hours，nitriteintheculturecouldbeabso

6、lutelyconsumedforA1501comparedto20％fornitSmutantItisconcludedthatthereexistsanotherapproachdifferentfromN瞞denilrifieafionprocessandlowmamboHzationactivityinA1501Bydesigningthespecificpnmer$，thenitSpromoterwasclonedbyPCRm

7、ethodThenitWasclonedintopGD926plasmidvectorwhichWasitsextensivehostrangesandwascapableofconjugalselftransfertoawidevarietyofGramnegativebacteriaThefusionvectorWaStransferredintowildtypestrainA1501andrpoNbyconjugation，and

8、thenBgalactosidaseacfivityWasassayedTheresultshowedthattheexpressionofnirSWasrepressedbyoxygen，anddenitrificationacfivityunderanaerobicconditionsWaShigherUnderdifferentnitriteconcentration，theexpressionofnitSwaslowandthe

9、highestactivityarrivedto2600units強(qiáng)eexpressionofnirSWasinducedbynitrateNitrogenaseacridtyWashighestintheprgSellSeofIOmmol／Lnitrateconcentration，about12900UnitsInthepresenceoftoohighnitrateconcentration(10retool／L)ortoolow

10、nitrateconcentration(O1mmol／L)，nitrogenaseactivityisabout3500unitsWhennitratewasusedasterminalelectronaccepterunderanaerobiccondition，theexpressionofnitSinrpoNWaslowerthaninwildtype，wasaboutonefourthinwildtypeItshowedtha

11、tnirspWasainduced(i54dependentpromoterTherewasnocharacteristic054sequenceinnirSpromoteronginSOitWassupposedthatthereexistsother054characteristicsequenceinnirSpromoteroriginA1SOcolOnizationonthesurfaceofriceIX)otofnitSmut

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