非對稱二甲基精氨酸在肺動脈高壓血管重構(gòu)中的作用.pdf

1、研究背景： 肺動脈高壓(PAH)是臨床常見疾病之一，以肺血管高收縮性和血管重構(gòu)為主要病理特征。血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)過度增殖是引起血管重構(gòu)的病理基礎(chǔ)。一氧化氮(NO)是最重要內(nèi)源性血管舒張因子之一，在維持血管正常生理功能中起關(guān)鍵作用。非對稱二甲基精氨酸(ADMA)是內(nèi)源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物，可抑制NOS活性，減少NO生成，被認(rèn)為是一種新的心血管疾病危險因子。體內(nèi)ADMA主要由二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)水解

2、代謝。動物實驗和臨床研究發(fā)現(xiàn)，肺動脈高壓時，DDAH表達(dá)下降，ADMA濃度上升，提示其可能參與PAH的形成。Rho激酶(ROCK)是影響VSMC收縮、增殖、遷移的重要激酶，在肺血管重構(gòu)中發(fā)揮重要作用。ADMA能激活內(nèi)皮細(xì)胞ROCK影響內(nèi)皮細(xì)胞活力揭示ADMA與ROCK之間存在關(guān)聯(lián)。因此，本實驗旨在研究ADMA在肺血管重構(gòu)中的作用并探討其作用是否與激活ROCK途徑有關(guān)。 方法： 1、動物實驗 220g～250g的Sprag

3、ue-Dawley大鼠，單次腹腔注射野百合堿(moncrotine，MCT，60mg/kg)建立肺動脈高壓模型。對照組腹腔注射同等劑量生理鹽水。28d后在水合氯醛麻醉下，頸動脈插管取血，迅速開胸，分離心臟和肺臟。檢測血漿ADMA(高效液相色譜，HPLC)、TGFβ1(ELISA)水平，分離心臟右心室、左心室+室間隔，稱重計算右心室/(左心室+室間隔)質(zhì)量比。右肺中葉以4％多聚甲醛固定、切片、HE染色觀察肺血管重構(gòu)情況；提取右肺下葉組織總

4、RNA，Real-time PCR檢測DDAH2、ROCK1及Transforming growth factor βl(TGFβ1)mRNA水平。 2、細(xì)胞實驗培養(yǎng)原代肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMC)，以ADMA(3，10，30 μM)孵育24h，另有一組同時給予ADMA(30μM)和ROCK特異性抑制劑Y-27632(10μM)處理24 h。噻唑藍(lán)比色(MTT)法和Luminescent分析法檢測細(xì)胞增殖；Real-Time

5、PCR檢測細(xì)胞ROCKmRNA水平。 結(jié)果： 1、野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動脈高壓形成，右心室肥厚明顯，肺小動脈顯著增厚；血漿ADMA濃度明顯升高，與血管重構(gòu)密切相關(guān)；肺組織中DDAH2表達(dá)顯著下調(diào)，ROCK1表達(dá)顯著增高。 2、ADMA(3，10 and 30μM)孵育PASMC 24h明顯促進細(xì)胞增殖，呈劑量依賴性。同時給予ROCK特異性抑制劑Y-27632(10 μM)能抑制ADMA(30μM，24h)誘導(dǎo)的RO