葡萄籽原花青素對(duì)兔實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的 (1)通過(guò)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷動(dòng)物模型觀察GSP的抗心肌缺血再灌注損傷效應(yīng)，并對(duì)其機(jī)制加以探討。 (2)觀察GSP對(duì)實(shí)驗(yàn)兔心律失常的發(fā)生率和心肌梗死范圍的影響。 (3)觀察GSP對(duì)兔血清肌酸磷酸激酶(CK)及同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)、白介素6(IL-6)的影響。 (4)觀察GSP對(duì)兔心肌細(xì)胞凋亡的影響。 方法

2、 (1)建立模型和實(shí)驗(yàn)分組：24只雄性新西蘭白兔，分籠喂養(yǎng)，飲水不限，飼料量為每只每天100-150g。觀察一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分為四組：假手術(shù)對(duì)照組、缺血再灌注對(duì)照組、GSP高劑量組(200mg/kg)、GSP低劑量組(100mg/kg)，每組6只。每日灌胃給藥1次，灌胃容積為2ml/kg。GSP高劑量組灌胃液中含GSP200mg/kg，GSP低劑量組灌胃液中含GSP100mg/kg，假手術(shù)組及缺血再灌注組僅給予等容積的飲用水。各組

3、兔均連續(xù)灌胃21天。 (2)標(biāo)本的采?。焊鹘M兔分別于結(jié)扎前、結(jié)扎30min、再灌注20min、再灌注60min和再灌注120min時(shí)，自后肢小隱靜脈取血3ml，自然凝固后，以3000rpm/min離心10min，分離血清后保存于-80℃，測(cè)定肌酸磷酸激酶(CK)及同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮索(ET)和白介素6(IL-6)。于再灌注120min末處死動(dòng)物，留取心臟作形態(tài)

4、學(xué)觀察和原位末端標(biāo)記(TUNEL)檢查。 (3)測(cè)定方法：血清CK、CK-MB含量應(yīng)用ENOEPRO型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。血清SOD、MDA、NO、ET、IL-6含量按試劑盒說(shuō)明采用不同的方法分別對(duì)5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定。兔心肌標(biāo)本分別應(yīng)用光鏡和透射電鏡觀察并拍照，并對(duì)其進(jìn)行原位末端標(biāo)記(TUNEL)染色。 (4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：各項(xiàng)測(cè)定值均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)，計(jì)量資料

5、處理均采用方差分析。 結(jié)果 與缺血再灌注對(duì)照組相比： (1)GSP明顯減輕了兔缺血再灌注時(shí)心肌細(xì)胞的破壞； (2)GSP對(duì)兔缺血再灌注時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞自穩(wěn)態(tài)失衡、急性炎癥的影響并不顯著； (3)GSP具有減輕兔實(shí)驗(yàn)性缺血再灌注損傷病變的效應(yīng)，這一作用主要與其能夠清除自由基及減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷有關(guān)； (4)GSP能明顯阻抑動(dòng)物心肌細(xì)胞凋亡的嚴(yán)重程度，提示GSP對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制可能是其抗缺血再灌注損