胚胎干細(xì)胞源性神經(jīng)前體細(xì)胞的免疫原性及同源性樹突狀細(xì)胞對其在腦移植耐受中的作用.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文胚胎干細(xì)胞源性神經(jīng)前體細(xì)胞的免疫原性及同源性樹突狀細(xì)胞對其在腦移植耐受中的作用姓名：梅愛農(nóng)申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張?zhí)K明20060301華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文目的運用“五步”法誘導(dǎo)ES—D3系鼠胚胎干細(xì)胞(mESCs)向NPCs分化。方法分化前ESCs在明膠瓶中傳代培養(yǎng)去處滋養(yǎng)層，在培養(yǎng)基中加入1000”／ml重組白血病抑制因子(rLIF)阻止ESCs分化。單細(xì)胞懸液在去除rLIF的

2、培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)4d以形成擬配體(EB)，轉(zhuǎn)入無血清ITSF培養(yǎng)基培養(yǎng)6d富集nstin陽性細(xì)胞，在有絲分裂原堿性成纖維生長因子(bFGF)作用下擴增6d，撤銷bFGF后在煙酰胺作用下誘導(dǎo)出神經(jīng)樣細(xì)胞。共計經(jīng)過5個步驟。結(jié)果經(jīng)由無血清培養(yǎng)基可獲得約80％以上的Nestin染色陽性NPCs，該細(xì)胞bFGF存在的情況下可反復(fù)傳代與擴增。當(dāng)去處bFGF后在煙酰胺的作用下，這些細(xì)胞可分化出GFAP或Tuj—l陽性的神經(jīng)樣細(xì)胞。結(jié)論本實驗從ESC

3、s中誘導(dǎo)出nestin染色陽性的NPC，為進一步的神經(jīng)生物學(xué)研究和細(xì)胞移植治療提供了充足的細(xì)胞來源。第二部分神經(jīng)前體細(xì)胞的免疫原性及向腦缺血大鼠腦內(nèi)移植免疫學(xué)現(xiàn)象觀察目的觀察體外mESCs和NPCs的免疫原性及NPCs腦內(nèi)移植之后的免疫學(xué)現(xiàn)象。方法1運用流式細(xì)胞儀檢測ESD3mESCs細(xì)胞及其衍生NPCs細(xì)胞表面MHC—I、MItCAI的組成型表達，并在20ng／mlY干擾素(IFNY)誘導(dǎo)作用下觀察NPCs細(xì)胞表面MHC—I、MHCI