酒石酸溴莫尼定治療內皮素-1誘導的兔慢性視神經損傷的實驗研究.pdf

1、目的：青光眼是全球第二位的致盲性眼病。如何阻止視網膜神經節(jié)細胞（retinal ganglion cells，RGCs）的凋亡，保護視功能是當前青光眼治療的首要任務。除了眼壓升高的機械壓迫機制，視神經乳頭缺血是青光眼視神經病變的病理機制之一，最具有代表性的是正常眼壓性青光眼（normal tension glaucoma，NTG）的視神經損害。本研究針對血管學說應用血管收縮因子內皮素-1（endothelin-1，ET-1）建立兔慢性視

2、神經損害模型，并探討新型α2-受體激動劑——0.2％酒石酸溴莫尼定（0.2％brimonidine tartrate，BMD；Alphagan）對這種模型是否具有視神經保護作用。
　　 方法：
　　 1實驗動物及分組：本實驗共分四組，首先將28只成年健康純種新西蘭大白兔（雌雄兼用）隨機分為A，B兩組，兩組內右眼定為模型眼A1組和B1組，分別與之對應的左眼定為對照眼A2組和B2組，每組14只眼。
　　 2實驗方法：

3、動物表麻下（0.5％鹽酸丙美卡因滴眼液），應用30-G微量注射器玻璃體腔注藥，A1組和B1組注入ET-1（10-6M，20μl），A2組和B2組注入0.9％氯化鈉注射液20μl，每周注射2次，連續(xù)4周。B1組和B2組給予0.2％酒石酸溴莫尼定滴眼液點眼，1滴/12小時直至取標本。
　　 3眼壓測量：注藥前1天、注藥后7天、14天、28天及42天各組均測量眼壓并記錄。
　　 4閃光視覺誘發(fā)電位（F-VEP）檢測：注藥前1天

4、、注藥后14天、28天及42天通過F-VEP評定視神經的損傷情況。觀察指標為F-VEP的P1波潛伏期LP1（ms）。
　　 5病理組織學觀察：于28天全麻下隨機摘取各組各7只眼球，余下者42天全麻下摘取，固定，視網膜組織制成石蠟切片做HE染色，光鏡下觀察視網膜組織的病理變化；做TUNEL染色，光鏡下觀察計數(shù)神經節(jié)細胞層5個高倍視野TUNEL染色陽性細胞的數(shù)量且作統(tǒng)計學分析。
　　 6電鏡觀察：分別于28天、42天在摘取的

5、各組眼球中每組分別隨機選取2只眼緊貼眼球切取球后1mm處視神經固定，制成環(huán)氧樹脂超薄切片，經鉛鈾染色，透射電鏡下觀察視神經軸突的超微結構改變。
　　 結果：
　　 1眼壓：各組初始眼壓無顯著性差異（P>0.05）。B1組、B2組眼壓在注藥后7天開始降低，42天時降至最低水平，均值分別為（15.93±1.10mmHg，15.54±1.01mmHg）。雙因素方差分析A1組與B1組眼壓差異性顯著（P<0.01），具體結果為從注

6、藥14天開始差異性顯著，持續(xù)至42天。A1組與A2組的眼壓及B1組與B2組的眼壓各時間點均無明顯差異（P>0.05）。
　　 2 F-VEP P1波潛伏期LP1變化情況：各組初始LP1無顯著性差異（P>0.05）。A1組LP1于注藥后14天開始逐漸延長，并持續(xù)至42天，最大值出現(xiàn)在28天，均值為47.86±3.07ms。然而B1組LP1相對穩(wěn)定，A2組、B2組LP1在各時間點無明顯改變。雙因素方差分析A1組與A2組的LP1及A1

7、組與B1組LP1差異顯著（P<0.01），具體結果為分別從注藥14天開始差異性顯著，并持續(xù)至42天。而B1組與A2組LP1及B1組與B2組LP1無明顯差異（P>0.05）。
　　 3組織學觀察
　　 3.1 HE染色：A2組和B2組在注藥后28、42天兔眼視網膜各層組織清晰可見，細胞排列整齊均勻，層次分明，無組織壞死及細胞變性。A。組視網膜較對照組視網膜神經節(jié)細胞數(shù)目明顯減少，細胞出現(xiàn)變性。在各時間點A1組較B1組視網膜

8、神經節(jié)細胞數(shù)明顯減少。
　　 3.2 FUNEL染色：A2組和B2組在注藥后28、42天未發(fā)現(xiàn)細胞核成棕黃色的陽性細胞。注藥28天時RGC層各組陽性細胞數(shù)有顯著性差異（P<0.05），其中A1組與其他三組有差異，B1與其他三組有差異，A2組與B2組無明顯差異。注藥42天時A1組與A2組、B1組、B2組均有差異，后三組之間無明顯差異。
　　 4透射電鏡觀察：注藥后28天、42天A2組和B2組視神經髓鞘完整，軸漿均勻，軸漿內

9、可見清晰的微絲、微管和線粒體等細胞器。注藥28天A1組可見視神經軸突髓鞘結構紊亂，軸索變性，細胞器減少，可見線粒體空泡化，雙層膜結構和嵴均消失，軸突之間可見膠質細胞。B1組視神經軸突髓鞘排列較整齊，可見微絲、微管等細胞器結構。注藥42天A1組可見視神經軸突髓鞘結構紊亂，軸索變性，細胞器更少見。B1組較28天時無明顯變化。
　　 結論：
　　 1通過玻璃體腔注射ET-1可以誘導兔視網膜神經節(jié)細胞的凋亡和視神經功能損傷的模型