細胞重編程技術(shù)和移植治療視神經(jīng)損傷的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 重編程人成纖維細胞成為視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞的研究
　　目的:①在重編程獲取來源于病人成纖維細胞誘導型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞(hiRGC細胞);②研究這些細胞的生物學特征。
　　方法:①篩選與RGC發(fā)育、分化相關(guān)的誘導因子;②構(gòu)建攜帶有轉(zhuǎn)錄因子的表達載體;③收集、培養(yǎng)病人頭皮成纖維細胞;④載體轉(zhuǎn)染和產(chǎn)生人誘導型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞細胞;⑤hiRGC細胞的生物學特性鑒定;⑥hiRGC

2、細胞的神經(jīng)電生理特征。
　　結(jié)果:以標準流程培養(yǎng)出病人的頭皮成纖維細胞，通過轉(zhuǎn)染含有Mash1，Math5和RAX基因的慢病毒表達載體，獲得了hiRGC細胞，該細胞具有神經(jīng)元形態(tài)和生理特征;經(jīng)細胞免疫組織化學鑒定和電生理檢測，證明該hiRGC具有與正常神經(jīng)元相似的生物學和生理學特征。
　　結(jié)論:使用Mash1，Math5和RAX三個基因可將成人成纖維細胞直接轉(zhuǎn)變成為具有神經(jīng)元細胞特征的人誘導型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞。
　　

3、第二部分 視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞移植玻璃體治療視神經(jīng)損傷的效果研究
　　目的:檢測誘導型視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞在移植進動物視網(wǎng)膜內(nèi)后的生物學行為、特征和功能，為證明該類細胞在體內(nèi)具有生理功能提供證據(jù)。
　　方法:①流式細胞術(shù)篩選hiRGC細胞;②制作裸小鼠視神經(jīng)損傷模型;③將hiRGC移植進入免疫缺陷鼠視網(wǎng)膜內(nèi)。③檢測hiRGC細胞在宿主眼內(nèi)的生理、生化特性;④評價hiRGC細胞移植對于裸小鼠視神經(jīng)功能恢復的影響情況。
　　結(jié)