不同濃度的蔗糖溶液玻璃化冷凍人類精子的研究.pdf

1、第一部分不同濃度的蔗糖溶液玻璃化冷凍經(jīng)上游法處理后的人類精子
　　目的:
　　探討使用非滲透性冷凍保護劑—蔗糖溶液,玻璃化凍存大體積(0.5ml)人類精子的可行性,旨在為臨床提供更適宜的精子凍融方法。
　　方法:
　　收集正常精液標本58份,每份精液經(jīng)上游法處理,收集上游精子懸液,分成6份,1份作為對照組(未處理),其余5份分別用常規(guī)慢速冷凍法、0.15M、0.20M、0.25M、0.30M蔗糖溶液冷凍精子,復蘇

2、后比較6組間精子活動率、前向運動精子百分率、精子質(zhì)膜完整性、精子DNA完整性及頂體完整性。
　　結(jié)果:
　?、倬踊顒勇省⑶跋蜻\動百分率結(jié)果:經(jīng)冷凍復蘇后,所有冷凍組精子活動率、前向運動百分率與冷凍前上游組精子活動率(95.7±2.0)％和前向運動精子百分率(92.2±3.8)%比較均下降,差異顯著(P<0.05),其中0.20M蔗糖冷凍組、0.25M蔗糖冷凍組和常規(guī)慢速冷凍組的精子活動率分別為(58.5±6.3%)、(53

3、.7±10.3)%和(54.2±5.3)%,3者間差異無顯著性(P>0.05),均明顯高于0.15M蔗糖冷凍組(46.8±7.2)%及0.30M蔗糖冷凍組(49.7±11.2)%(P<0.05)。前向運動百分率結(jié)果顯示:0.20M蔗糖冷凍組的精子前向運動率(47.5±6.8%)顯著高于常規(guī)慢速冷凍組(36.4±8.7%)、0.15M蔗糖冷凍組(35.4±7.4%)、0.25M蔗糖冷凍組(34.8±9.9)%及0.30M蔗糖冷凍組(24.

4、3±9.3)%,差異顯著(P<0.05),其中0.15M蔗糖冷凍組、0.25M蔗糖冷凍組與常規(guī)慢速冷凍組比較差異無顯著性(P>0.05);0.30M蔗糖冷凍組顯著低于常規(guī)慢速冷凍組(P<0.05)。
　?、诰幽ね暾式Y(jié)果:所有冷凍組精子膜完整率較冷凍前上游組(99.0±0.9)%均顯著下降(P<0.05)。在冷凍組中0.20M蔗糖冷凍組的精子膜完整率(73.2±6.9)%顯著高于其它冷凍組(P<0.05)。常規(guī)慢速冷凍組,0.2

5、5M蔗糖冷凍組和0.30M蔗糖冷凍組分別為(63.9±6.3)%、(67.0±11.2)%和(62.9±12.4)%,3者間無統(tǒng)計學差異(P>0.05),0.15M蔗糖冷凍組(59.7±8.8)%顯著低于其它冷凍組(P<0.05)。
　?、劬覦NA完整率結(jié)果:經(jīng)冷凍復蘇后,常規(guī)慢速冷凍組、0.15M、0.20M、0.25M和0.30M蔗糖冷凍組精子DNA完整率分別為(87.2±4.7)%、(88.5±2.9)%、(90.1±2.

6、8)%、(88.1±3.9)%和(88.6±3.1)%,組間無統(tǒng)計學差異(P>0.05);但均顯著低于冷凍前上游組(93.0±3.3)%(P<0.05)。
　?、芫禹旙w完整率:經(jīng)冷凍復蘇后,所有冷凍組精子頂體完整率較冷凍前上游組(94.1±2.8%)均顯著下降(P<0.05)。0.15M、0.20M、0.25M和0.30M蔗糖冷凍組精子DNA完整率分別為(48.4±8.6)%、(53.7±10.0)%、(53.8±8.4)%、(

7、53.4±12.5)%,組間無統(tǒng)計學差異(P>0.05);均顯著高于常規(guī)慢速冷凍組(35.9±9.7)%(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　終濃度為0.20M的蔗糖溶液玻璃化冷凍人類精子解凍后可以獲得更高前向運動精子百分率,精子膜完整率和精子頂體完整率;相較常規(guī)慢速冷凍法,終濃度0.20M的蔗糖溶液玻璃化冷凍法更能夠有效避免精子在凍融過程中的損傷,并且玻璃化冷凍方法簡便、快速、經(jīng)濟、安全有效。
　　第二部分0.20M蔗

8、糖溶液玻璃化冷凍附睪精子的研究
　　目的:
　　探討使用終濃度為0.20M蔗糖溶液玻璃化冷凍附睪精子(PESA)的可行性及應用性。
　　方法:
　　實驗前首先對蔗糖組精子進行受精能力驗證。收集IVF和ICSI周期中未成熟的卵母細胞(MI),進行未成熟卵培養(yǎng)。卵母細胞經(jīng)培養(yǎng)成熟后,使用0.20M蔗糖組冷凍復蘇后的上游精子行ICSI操作,并統(tǒng)計受精率,卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率。驗證可行性后,再通過比較終濃度為0.20M蔗糖

9、溶液玻璃化法(蔗糖組)和常規(guī)慢速冷凍法(常規(guī)組)的精子復蘇率、ICSI操作后其卵母細胞受精率、卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率,評價兩種冷凍方法的冷凍效能。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)培養(yǎng)成熟23枚卵母細胞后,使用0.20M蔗糖組冷凍復蘇后的上游精子行ICSI操作,受精率,卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率分別為73.9%、88.2%和20.0%。18例患者附睪精子標本經(jīng)兩種方法冷凍后,蔗糖組和常規(guī)組中各有1例樣本未見活動精子(蔗糖組和常規(guī)組冷凍失敗

10、的樣本并不為同1例樣本),余均有活動精子。蔗糖組與常規(guī)組的復蘇率均低,分別為(22.0±12.7)%和(23.7±8.5)%,兩者差異無顯著性(P>0.05)。78枚成熟的卵母細胞使用蔗糖組的精子行ICSI操作,其卵母細胞受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率分別為88.5%,100%,68.1%和50%;95枚成熟的卵母細胞使用常規(guī)組的精子行ICSI操作,其卵母細胞受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率分別為85.3%,98.8%,6