高血壓人群中進行原發(fā)性醛固酮增多癥的篩查及醛固酮對脂肪細胞胰島素信號轉導通路的影響.pdf

1、第一部分高血壓人群中進行原發(fā)性醛固酮增多癥的篩查
　　 目前，ARR已經被廣泛應用于PA的篩查。2008年由歐洲內分泌學會等五個國際協(xié)會共同制定的PA診治指南(下稱PA指南)也推薦使用ARR在高血壓人群中進行PA的篩查。盡管應用ARR在高血壓患者中進行PA篩查的研究已長達20多年，也證實了其在篩查中具有較好的特異性和敏感性，但目前ARR在PA篩查中的切點尚不一致。同一患者在不同狀態(tài)下ARR也存在很大變異。ARR存在變異是由于受多

2、種因素的影響，從總體上看，可以分成影響ARR的內在因素和外在因素兩大方面。內在因素包括：RAS的生理調節(jié)因素(如血鉀等)，年齡、性別和種族，醛固酮分泌的節(jié)律和體位，血壓水平等；外在因素包括藥物，鈉鹽的攝入量，標本的采集過程和檢測方法的特異性和敏感性等?？梢娭挥辛私釧RR的影響因素，并對可能的影響因素進行標準化，或對不同狀態(tài)下的篩查制定不同的切點，才能有效地進行PA的篩查。但目前國內外未見對ARR的影響因素系統(tǒng)研究的報導。
　　

3、在PA篩查中，不少實驗室也摸索出了各種可能提高ARR篩查的敏感性和特異性的方法，以期提高ARR篩查PA的效率，包括：口服卡托普利后測定ARR；通過擴大PAC在篩查中的作用來提高篩查的效率，如應用PAC值的平方與PRA的比值(PAC2/PRA)及PAC值的立方與PRA的比值(PAC3/PRA)代替ARR；直接測定血漿活性腎素濃度(PRC)取代目前的PRA檢測等等。另外，由于我國很多醫(yī)療單位未開展PAC和PRA的檢測，這在一定程度上限制了A

4、RR的使用，故依據PA的特點尋找更簡單和實用的，尤其適合廣大基層醫(yī)院進行PA篩查的指標，具有重要意義。
　　 本研究的主要目的在于：(1)在高血壓人群中進行PA的篩查，獲得PA的患病率；(2)探討年齡、體位因素對ARR的影響；(3)比較不同PA篩查方法的篩查效率。
　　 小結：
　　 1.本組高血壓人群PA的患病率是10.92％。
　　 2.ARR是PA篩查的有效指標，立位1h ARR具有最高的敏感性和特

5、異性，推薦切點為30.82 ng·dl-1/ng·ml-1·h-1。聯(lián)合ARR和PAC作為PA篩查的切點，可以提高ARR篩查的特異性。
　　 3.不同體位下ARR取不同切點可以獲得相近的篩查效率。不同年齡患者的ARR的最佳切點有差異。
　　 第二節(jié)不同篩查方法對原發(fā)性醛固酮增多癥篩查效率的比較研究
　　 研究方法：
　　 1.入組人群：收集自2006年9月開始至2009年7月，在我院內分泌科門診就診和病房

6、住院的原發(fā)性高血壓患者296例。同期診斷的PA患者39例，來自體檢中心的健康志愿者158例。
　　 2.試驗過程：試驗前準備同第一部分第一節(jié)。試驗前當天要求受試者保持坐位15 min后測量血壓，隨后保持立位1h，期間要求受試者保持安靜。保持立位1h后采血測定PAC、PRA、PRC、血鈉和血鉀。留取24h尿檢測尿醛固酮、尿鉀和尿鈉。
　　 3.PA的診斷和分型同第一部分第一節(jié)
　　 4.相關公式ARR=PAC(ng

7、/dl)/PRA(ng/ml/h)AARR=PAC(ng/dl)/PRC(ng/dl)UARR=Uald(μg/24h)/PRA(ng/ml/h)SUSPUP=血鈉(mmol/L)/尿鈉(mmol/24h)÷血鉀(mmol/L)/尿鉀(mmol/24)SUSPPUP=血鈉(mmol/L)/尿鈉(mmol/24h)÷血鉀2(mmol/L)/尿鉀(mmol/24h)
　　 5.實驗室檢查
　　 PAC、PRA和PRC的檢測均

8、采用放射免疫法，PAC和PRC試劑盒購自D SL(Texas，USA)、PRA試劑盒購自Diasorin(Minnesota,USA)。血、尿電解質測定采用離子選擇電極法測定。
　　 6.統(tǒng)計學分析
　　 統(tǒng)計分析同第一部分第一節(jié)。
　　 小結：
　　 1. AARR和UARR的PA篩查效率與ARR相當。立位1hAARR的推薦切點為42.36ng·dl-1/ng·dl-1，UARR的推薦切點為11.45μ

9、g/d-1/ng·ml-1·h-1。
　　 2.SUSPUP和SUSPPUP的篩查效率與單純使用PAC進行篩查的效率相當，在沒有條件開展PAC和PRA檢測的醫(yī)療單位可用于PA的初步篩查，兩者的推薦切點分別為：14.44和4.08。
　　 第二部分：醛固酮與糖代謝異常
　　 臨床和基礎研究發(fā)現，異常增高的醛固酮和糖代謝紊亂有一定的關系。但醛固酮導致糖代謝異常的機制尚不明確。近年研究發(fā)現醛固酮可能通過減少胰島素受體底

10、物-1(IRS-1)的表達而干擾胰島素信號轉導。另外，醛固酮的這種作用是通過鹽皮質激素受體(MR)抑或糖皮質激素受體(GR)尚有爭議。醛固酮與胞漿中的MR結合后可以產生基因組效應和非基因組效應，后者的信號轉導是廣泛的。醛固酮通過何種途徑導致IRS-1表達的異常，尚需要進一步研究。
　　 本部分研究目的：(1)了解不同糖代謝狀態(tài)下醛固酮水平的差異，并初步探討醛固酮在糖尿病發(fā)生中的作用；(2)探討醛固酮對胰島素信號轉導的影響，及ER

11、K信號通路在該效應中的作用。
　　 小結：
　　 1. Uald與FINS和BMI均呈正相關，SAC與HOMA-IR存在相關性；
　　 2.不同糖代謝狀態(tài)人群醛固酮和PRA有差異。
　　 第二節(jié)醛固酮在3T3-L1脂肪細胞中通過鹽皮質激素受體影響胰島素信號轉導通路
　　 研究方法：
　　 1.細胞培養(yǎng)及干預
　　 3T3-L1前脂肪細胞在含有10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，

12、在約達到100％融合后48h換用含0.5M/L3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)、1.7μM/L胰島素、1μM/L地塞米松和10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液兩天，然后換用含1.7μM/L胰島素和10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)兩天，隨后換用完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，約8-10天后細胞分化成熟。
　　 2.氚標葡萄糖攝取率檢測
　　 各濃度醛固酮處理后的3T3-L1脂肪細胞分別行基礎葡萄糖攝取率檢測和胰島素刺激后葡萄糖攝

13、取率檢測。通過液體閃爍計數儀測定[3H]2-脫氧葡萄糖(2DG)放射活性，并以Bradford法測定樣品蛋白濃度較正2DG攝取率結果。最后結果=樣品每分鐘衰變數/相應蛋白濃度(cpm/mg protein)。
　　 3.實驗分組
　　 完全分化成熟的3T3-L1脂肪細胞細胞分為五組，具體如下。各組3T3-L1前脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞后，用含1％FBS的DMEM培養(yǎng)液同步化24h，然后分組處理。C、D、E組先分別采用安

14、體舒通、糖皮質激素受體拮抗劑RU486、ERK1/2磷酸化抑制劑UO126作用30分鐘后，各組同時加入醛固酮作用24h。采用胰島素(100nM)處理15分鐘后行氚標葡萄糖攝取率檢測和提取細胞總蛋白。
　　 A組：空白對照組
　　 B組：醛固酮(10-7M)作用組
　　 C組：醛固酮+安體舒通(10-5M)處理組
　　 D組：醛固酮+RU486(10-5M)處理組
　　 E組：醛固酮+UO126(1

15、0-5M)處理組
　　 (1)以上5組細胞氚標葡萄糖攝取率檢測
　　 (2)以上5組細胞分別提取細胞總蛋白，Western Blot方法檢測胰島素刺激后的IRS-1，AKT蛋白ERK1/2蛋白、gsk-3β表達及其磷酸化。
　　 4.統(tǒng)計分析
　　 實驗數據均符合正態(tài)分布或經轉換后呈正態(tài)分布者用均數±標準差表示，三組間比較采用單因素方差分析，方差齊性則兩兩比較采用最小有意義差異LSD法檢驗。顯著性水準為P

16、小于0.05。統(tǒng)計分析在SPSS13.0統(tǒng)計軟件包上完成。
　　 小結：
　　 1.醛固酮可以抑制3T3-L1脂肪細胞胰島素刺激的葡萄糖攝取率，這種作用呈現醛固酮劑量依賴性。
　　 2.醛固酮主要通過減少3T3-L1脂肪細胞的IRS-1表達、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化，影響胰島素信號轉導。
　　 3.醛固酮在3T3-L1細胞中至少部分通過MR引起胰島素刺激的葡萄糖攝取率下降，與GR無關，與ERK1/