低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白2在阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的發(fā)病被認(rèn)為與遺傳、年齡和環(huán)境因素密切相關(guān)。近年來(lái)關(guān)于低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白（Low-density lipoprotein receptor-relatedprotein,LDLR）及其所介導(dǎo)的胞內(nèi)信號(hào)系統(tǒng)在AD發(fā)病中的作用日益成為關(guān)注的焦點(diǎn)。病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，該家族成員之一的低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白2（LRP2,megalin)在脈絡(luò)膜叢中的表達(dá)及其功能隨年齡增長(zhǎng)而逐漸降低

2、，遺傳學(xué)研究更進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)LRP2基因突變可導(dǎo)致一些神經(jīng)變性疾?。ㄈ鏒onnai-Barrow綜合征）的發(fā)生。因此，LRP2是否也在AD發(fā)病機(jī)制發(fā)揮了作用值得進(jìn)一步研究。
　　此前，來(lái)自高加索人群的研究發(fā)現(xiàn)，LRP2基因多態(tài)性可能會(huì)增加AD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而在中國(guó)漢族人群中卻無(wú)類(lèi)似相關(guān)性研究。我們采用堿基錯(cuò)配引入酶切位點(diǎn)的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（CRS-RFLP）方法在182例AD患者和179例健康對(duì)照人群中，對(duì)LRP2基因啟動(dòng)子區(qū)rs3

3、755166 SNP位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LPR2rs3755166(G>A)等位基因的頻率在AD患者和對(duì)照組中存在顯著差異(P<0.05)。
　　緊接著，我們?cè)贏β1-42處理后的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y）中發(fā)現(xiàn)LRP2蛋白表達(dá)的下調(diào)；利用小干擾RNA（SiRNA）技術(shù)下調(diào)LRP2后，可明顯增加Aβ1-42誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性及促凋亡作用，并發(fā)現(xiàn)這一機(jī)制可能是通過(guò)減少AKT的磷酸化來(lái)實(shí)現(xiàn)的。我們又進(jìn)一步通過(guò)免疫熒光、免疫共沉

4、淀技術(shù)（CO-IP）證實(shí)LRP2可與AKT結(jié)合，且過(guò)表達(dá)LRP2mini-receptor后，可以有效拮抗Aβ1-42的毒性及促凋亡作用，而AKT抑制劑LY294002則可逆轉(zhuǎn)LRP2的這一拮抗（保護(hù)）作用。
　　此外，我們對(duì)LPR2蛋白表達(dá)的上游調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了探討。眾所周知，microRNA是蛋白轉(zhuǎn)錄后修飾的重要機(jī)制，在蛋白表達(dá)的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。我們通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)miR-146a在AD患者外周血單核細(xì)胞

5、（PBMC）中較正常對(duì)照表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步利用生物信息學(xué)檢索、Western blot和熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)分析，明確miR-146a可以通過(guò)與LRP2 mRNA的3’非翻譯區(qū)（untranslatedregion,UTR）結(jié)合，從而抑制LRP2的翻譯，在SH-SY5Y細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)miR-146a可顯著下調(diào)LRP2的表達(dá)水平，影響LRP2的抗凋亡作用，使細(xì)胞對(duì)Aβ處理后的毒性更顯著。
　　綜上，LRP2基因多態(tài)性在中國(guó)漢族人群