竹蓀多糖對人肝癌細(xì)胞HCC-LM3抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：研究竹蓀多糖對人肝癌細(xì)胞株 HCC-LM3細(xì)胞生長抑制情況及對細(xì)胞周期、凋亡及凋亡相關(guān)基因mRNA和蛋白表達的影響，初步探討竹蓀多糖對 HCC-LM3細(xì)胞生長影響的作用機制，為竹蓀多糖的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。
　　方法：采用細(xì)胞增殖-毒性檢測試劑盒（CCK-8）檢測0.5、1、2、4mg/ml濃度的竹蓀多糖作用人肝癌細(xì)胞 HCC-LM3，不同時間段細(xì)胞增殖活力的變化，計算生長抑制率；采用流式PI單染法和Annexin V-F

2、ITC/PI雙染法檢測HCC-LM3細(xì)胞經(jīng)2.5mg/ml竹蓀多糖孵育24h，48h，72h后，細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的變化情況；采用RT-qPCR和Western-Blot檢測竹蓀多糖孵育HCC-LM3細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡相關(guān)基因在mRNA和蛋白水平表達的變化。
　　結(jié)果：1. HCC-LM3細(xì)胞經(jīng)竹蓀多糖處理后增殖活力隨著時間延長和劑量增加逐漸下降，細(xì)胞生長抑制率與作用時間和劑量存在依賴性，三個時間段的IC50分別為3.713mg

3、/ml（24h）、2.409mg/ml（48h）、1.863 mg/ml（72h）。
　　2.竹蓀多糖干預(yù)后，HCC-LM3細(xì)胞周期發(fā)生改變，不同時間段細(xì)胞G2/M期阻滯不同，隨時間的延長阻滯效果增強。
　　3. HCC-LM3細(xì)胞經(jīng)竹蓀多糖干預(yù)后出現(xiàn)凋亡，72h凋亡率為33.49％，早期凋多于晚期凋亡；
　　4. RT-qPCR檢測顯示經(jīng)2.5mg/ml竹蓀多糖處理HCC-LM3細(xì)胞48h后凋亡相關(guān)基因Bax、Cas

4、pase-3 mRNA表達量增加，Bcl-2 mRNA表達無明顯改變，Bcl-2/Bax值降低。
　　5.Western Blot檢測顯示經(jīng)2.5mg/ml竹蓀多糖處理HCC-LM3細(xì)胞48h后，促凋亡蛋白Bax及Caspase-3表達上調(diào)，抑凋亡蛋白Bcl-2表達無明顯改變，Bcl-2/Bax值降低。
　　結(jié)論：1.竹蓀多糖可抑制 HCC-LM3細(xì)胞生長，并具有明顯的時間、劑量效應(yīng)關(guān)系；
　　2.竹蓀多糖通過阻滯HC