RhoB基因表達對結(jié)腸癌細胞抑制作用的實驗研究.pdf

1、實驗?zāi)康?觀察脂質(zhì)體介導(dǎo)的RhoB轉(zhuǎn)染對人結(jié)腸癌細胞HCT116的影響,為結(jié)腸癌的臨床治療提供新的思路。
　　 實驗方法:本實驗以人結(jié)腸癌細胞HCT116為研究對象。實驗共分五組:RhoB蛋白過表達組(pcDNA4-RhoB組)及其陰性對照組(pcDNA4-EGFP組),RhoB蛋白干擾組(pGenesil-1-RhoB組)及其陰性對照組(pGenesil-1-HK組),空白對照組(HCT116組)。將質(zhì)粒(pcDNA4-Rho

2、B、pcDNA4-EGFP、pGenesil-1-RhoB、pGenesil-1-HK)通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入HCT116細胞中,通過熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果并計算轉(zhuǎn)染效率;通過Western-Blot免疫印跡法檢測各組細胞中RhoB蛋白的表達,MTT法檢測細胞增殖活性,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。
　　 實驗結(jié)果:(1)熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光,顯示脂質(zhì)體成功將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入結(jié)腸癌HCT116細胞中。轉(zhuǎn)染平均效率約為82.4%(2)We

3、stern-Blot檢測各組細胞中RhoB蛋白的表達,結(jié)果顯示:pcDN&-RhoB組RhoB蛋白的表達明顯高于其他組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。pGenesil-1-RhoB組RhoB蛋白表達與HCT116組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。(3)MTT法結(jié)果顯示:從第二天開始,與pcDNA4-EGFP組和HCT116組相比,pcDNA4-RhoB組細胞增殖明顯受抑制,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(4)細胞凋亡結(jié)