AML1-ETO活化HIF1α促進(jìn)白血病發(fā)生的機(jī)制研究.pdf

1、目的:t(8，21))染色體易位是急性髓系白血?。ˋcute myeloid leukemia, AML）中最常見的染色體易位，占全部AML患者的12％～15％，M2亞型的AML患者的40％～80％。該易位導(dǎo)致21號染色體的AML1基因與8號染色體上的ETO基因發(fā)生融合，形成一個(gè)新的原癌基因AML1-ETO，其蛋白表達(dá)產(chǎn)物是導(dǎo)致AML發(fā)生的重要因素。缺氧誘導(dǎo)因子1α（Hypoxia inducible factorlα，HIF1α）是調(diào)

2、控正常和腫瘤細(xì)胞對缺氧應(yīng)答反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子，其調(diào)節(jié)的靶基因有40余種，例如促紅細(xì)胞生成素、血管內(nèi)皮生長因子、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1等，主要涉及到能量代謝和血管生成方面，有利于組織細(xì)胞的能量代謝和氧輸送以適應(yīng)缺氧環(huán)境。在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中，HIF1α作為一種原癌基因過度表達(dá)，能夠促進(jìn)腫瘤組織的血管生長，使腫瘤細(xì)胞凋亡受阻，延長腫瘤細(xì)胞的生存時(shí)間。研究表明，AML中HIF1α表達(dá)水平增高促進(jìn)白血病干細(xì)胞自我更新，并與白血病微小殘留病變及化療耐藥相關(guān)

3、，影響患者預(yù)后。我們前期研究發(fā)現(xiàn)AML1-ETO融合基因陽性的患者HIF1α高表達(dá)，生物信息學(xué)提示HIF1α啟動(dòng)子區(qū)存在AML1的結(jié)合位點(diǎn)。本研究旨在明確AML1-ETO融合基因與HIF1α之間的潛在調(diào)控關(guān)系及對白血病細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響。
　　 材料與方法:構(gòu)建HIF1α啟動(dòng)子-熒光素酶報(bào)告基因載體，與AML1-ETO表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，采用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證AML1-ETO對HIF1α啟動(dòng)子活性的影響。采用

4、染色質(zhì)免疫共沉淀方法驗(yàn)證生理狀態(tài)下AML1-ETO融合蛋白與HIFIα啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合。采用RT-PCR方法檢測沉默AML1-ETO表達(dá)前后的SKNO-1細(xì)胞中HIF1α的mRNA表達(dá)水平。采用CCK8及流式細(xì)胞術(shù)檢測HIF1α特異性抑制劑Echinomycin對AML1-ETO陽性的白血病細(xì)胞系的增殖及細(xì)胞凋亡的影響，并采用Western Blot檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的活化。最后檢測Echinomycin對AE9a轉(zhuǎn)基因白血病小鼠的治療

5、作用。
　　 結(jié)果:AML1-ETO融合蛋白能夠與HIF1α啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合，并激活HIF1α啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)其mRNA的表達(dá)。HIF1α抑制劑Echinomycin能夠明顯抑制AML1-ETO陽性白血病細(xì)胞系SKNO-1的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡增加，caspases3、caspases8、caspases9活化。采用Echinomycin治療的AE9a轉(zhuǎn)基因白血病小鼠的生存期（中位生存期46天）與對照組（中位生存期36天）相比明顯延