比較HSP70在兔不同動脈間的表達及其與動脈粥樣硬化的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是許多心腦血管疾病發(fā)生的共同基礎(chǔ)，給人類的健康帶來了極大的危害。動脈粥樣硬化是一種多因素參與的慢性彌漫性疾病，對全身各類血管床均造成影響。然而有些血管床對AS的易感性較低。現(xiàn)有研究認為內(nèi)乳動脈（internal mammary arteries，IMA）具有抗動脈粥樣硬化的作用。與冠狀動脈相比，內(nèi)乳動脈有較低的粥樣硬化發(fā)生率，故常作為冠脈搭橋術(shù)常用的替代血管。熱休克蛋

2、白70(heat shock protein70，HSP70)作為一種應(yīng)激蛋白，在動脈粥樣硬化的進程中發(fā)揮重要的作用。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)HSP70基因表達在人內(nèi)乳動脈與冠狀動脈中存在差異。本研究通過高脂喂養(yǎng)建立動脈粥樣硬化兔模型，分別從基因、蛋白及組織三個水平比較HSP70在正常兔和動脈粥樣硬化兔冠狀動脈與內(nèi)乳動脈中的表達情況，進一步闡明HSP70與動脈粥樣硬化的關(guān)系，探討不同動脈間的差異，為研究內(nèi)乳動脈抗動脈粥樣硬化的機制提供了一種新

3、思路。
　　方法:
　　應(yīng)用健康成年新西蘭大白兔30只。按隨機分為兩組:對照組(n=10)，高脂組(n=20)。予以對照組普通飼料喂養(yǎng)，予以高脂組高脂飼料喂養(yǎng)（高脂飼料:1％膽固醇+5％豬油+10％蛋黃粉+84％普通飼料）。飼養(yǎng)12周后處死所有白兔，分離冠狀動脈及內(nèi)乳動脈，完成以下兩部分實驗:1.確認兔動脈粥樣硬化模型建立，應(yīng)用HE染色法觀察內(nèi)乳動脈和冠狀動脈管壁形態(tài)。2.采用病理及分子生物學(xué)方法，對冠狀動脈和內(nèi)乳動脈組織行

4、RT-PCR、Real-Time PCR、Western Blotting及免疫組織化學(xué)法研究，比較HSP70在兩動脈間的表達量。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行組內(nèi)和組間比較及分析。
　　結(jié)果:
　　(1)實驗結(jié)束時對照組共10只，高脂組共18只進入統(tǒng)計學(xué)分析。連續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料4周、8周和12周時高脂組兔血脂水平較同期對照組顯著升高(P＜0.05)。(2) HE染色可見高脂組冠狀動脈形成動脈粥樣硬化斑塊，內(nèi)乳動脈內(nèi)膜

5、粗糙、斷裂，中膜增厚、平滑肌細胞排列不齊等早期粥樣硬化改變，說明動脈粥樣硬化模型建立成功。正常對照組兩動脈內(nèi)膜完整，未見動脈粥樣硬化病變。(3)12周后，免疫組織化學(xué)法檢測正常對照組和高脂組冠狀動脈及內(nèi)乳動脈中均有HSP70表達。(4)分別用RT-PCR、Real-Time PCR及Western blotting從基因及蛋白兩個水平檢測結(jié)果顯示，正常組內(nèi)乳動脈HSP70表達水平高于冠狀動脈，而高脂組冠狀動脈HSP70表達水平高于內(nèi)乳動

6、脈，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);高脂喂養(yǎng)后，冠狀動脈及內(nèi)乳動脈內(nèi)HSP70表達水平均下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.單純高脂喂養(yǎng)12周可誘導(dǎo)兔冠狀動脈內(nèi)形成粥樣硬化斑塊，誘導(dǎo)內(nèi)乳動脈內(nèi)膜粗糙、斷裂，中膜增厚、平滑肌細胞排列不齊等早期粥樣硬化改變，提示動脈粥樣硬化兔模型成功建立。
　　2.正常組內(nèi)乳動脈HSP70表達水平明顯高于冠狀動脈，而高脂組冠狀動脈HSP70表達水平明顯高于內(nèi)乳