通過(guò)抗體轉(zhuǎn)型改變尋常型天皰瘡抗體致病性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、天皰瘡(pemphigus)是一嚴(yán)重的大皰性皮膚粘膜性疾病，其中尋常型天皰瘡(pemphigus vulgaris，PV)具有最常見(jiàn)、病情重和死亡率最高的特點(diǎn)。PV亦是一個(gè)器官特異性自身免疫病的典型，患者體內(nèi)存在針對(duì)PV抗原(pemphigus vulgaffs antigen，PVA)——大部分為橋粒芯糖蛋白(desmoglein，Dsg)3，也有部分為Dsgl的IgG型自身抗體，該抗體與角質(zhì)形成細(xì)胞 (keratinocyte，KC

2、)表面的抗原分子結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞間的粘附能力喪失，出現(xiàn)PV特有的臨床表現(xiàn)和組織病理學(xué)改變。疾病的活動(dòng)和抗體的滴度及其亞型有關(guān)，其中IgGl和IgG4為PV患者體內(nèi)最重要的兩種亞型?；顒?dòng)期患者以IgG4亞型為主，將此類患者的血清被動(dòng)轉(zhuǎn)移至新生鼠可導(dǎo)致新生鼠出現(xiàn)天皰瘡樣的皮損；而消退期或靜止期的患者以IgGl亞型為主，將此種類型的血清被動(dòng)轉(zhuǎn)移至新生鼠不產(chǎn)生天皰瘡樣改變。因此，IgG4型的抗體是Pv的“致病性抗體”，而IgGl可能僅僅是PV的“

3、血清學(xué)標(biāo)記”。 為了通過(guò)一些干預(yù)手段對(duì)抗體的亞型進(jìn)行轉(zhuǎn)換，從而達(dá)到疾病的治療目的，本研究首先利用ELISA方法對(duì)瑞金醫(yī)院門診及住院的52例PV患者的抗Dsg3、抗Dsgl的IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)兩種抗體的滴度均有升高，且Dsg3的滴度和粘膜損害相關(guān)。然后對(duì)患者血清中的IgG抗體亞型進(jìn)行了檢測(cè)，并與正常對(duì)照比較，發(fā)現(xiàn)IgG4亞型抗體的滴度在患者中明顯高于正常對(duì)照，統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在顯著性差異；而IgGl亞型抗體的滴度在患者和正常對(duì)照

4、間無(wú)明顯差異。為證明IgG4亞型抗體致病性抗體提供了臨床依據(jù)。最后在構(gòu)建重組．Dsg3 ECl-2表位融合蛋白的基礎(chǔ)上，利用免疫佐劑的干預(yù)對(duì)抗體亞型進(jìn)行轉(zhuǎn)換。分別采用主要誘導(dǎo)Thl型細(xì)胞免疫應(yīng)答的完全弗氏佐劑(complete Freund<',>s adiuvant，CFA)和Th2型細(xì)胞免疫應(yīng)答為主的氫氧化鋁[A1(OH)3]佐劑，乳化ECl-2蛋白抗原后分別免疫C57BL／6小鼠，對(duì)免疫后細(xì)胞因子的表達(dá)、抗體的產(chǎn)生及其滴度、亞型進(jìn)

5、行研究(人的IgGl在鼠相當(dāng)于IgG2a，人的IgG4在鼠為IgGl)，并通過(guò)體外表皮培養(yǎng)和體內(nèi)聯(lián)合表皮松解毒素A(exfoliative toxin A，ETA)后被動(dòng)轉(zhuǎn)移抗血清至BALB／c新生鼠來(lái)觀察抗體的致病性。研究結(jié)果顯示，免疫后CFA．組小鼠產(chǎn)生較多的Thl型細(xì)胞因子IFNv；AlfOH)3組則以Th2型細(xì)胞因子IL-4為主。兩組小鼠均有特異性的抗ECl-2 IgG型抗體產(chǎn)生，但其亞型不同，CFA組以IgG2a為主，而A1(

6、OH)3組則僅表達(dá)IgGl；CFA組小鼠血清間接免疫熒光(indirect immunofluorenscence,IIF)示弱的熒光沉積，而AI(OH)3組IIF檢測(cè)則表現(xiàn)為明亮的熒光沉積。向體外培養(yǎng)的新生鼠表皮中加入CFA組小鼠抗血清，僅出現(xiàn)輕度的棘層松解，而加入Al(OH)3組抗血清后則出現(xiàn)明顯的鏡下表皮內(nèi)大皰。被動(dòng)轉(zhuǎn)移試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移了CFA組抗血清的新生鼠未出現(xiàn)表皮內(nèi)水皰，而轉(zhuǎn)移AI(OH)3組抗血清的新生鼠皮膚表面出現(xiàn)大皰，尼氏

7、征陽(yáng)性。以上實(shí)驗(yàn)顯示經(jīng)聯(lián)合A1(OH)3佐劑免疫小鼠后產(chǎn)生的抗血清以IgGl亞型(相當(dāng)于人的IgG4)為主，能和天然抗原結(jié)合，引起表皮松解，有顯著的致病性；而聯(lián)合CFA佐劑免疫后，小鼠的抗血清以IgG2a亞型(相當(dāng)于人的IgGl)為主，在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均無(wú)明顯的致病性?？傊?，通過(guò)本項(xiàng)研究觀察到，在PV患者中，IgG4型抗體和疾病密切相關(guān)；在小鼠實(shí)驗(yàn)中，明確了PV的致病性抗體亞型，通過(guò)不同免疫佐劑干預(yù)，其抗體亞型可發(fā)生轉(zhuǎn)換，為進(jìn)一步探索PV