雞源致病性沙門(mén)氏菌毒力基因與致病性的相關(guān)性研究.pdf

1、沙門(mén)氏菌具有廣泛的宿主，是一種重要的人畜共患病的病原菌。近年來(lái)，抗菌藥物在臨床上的普遍使用甚至濫用，導(dǎo)致沙門(mén)氏菌的耐藥問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重。沙門(mén)氏菌能夠入侵宿主體內(nèi)增殖和致病，與其毒力基因密切相關(guān)。本研究對(duì)雞源致病性沙門(mén)氏菌進(jìn)行分離鑒定，對(duì)其耐藥性、致病性進(jìn)行測(cè)定，對(duì)其耐藥基因、毒力基因進(jìn)行檢測(cè)，分析耐藥基因與耐藥表型、毒力基因與致病性的關(guān)系，為沙門(mén)氏菌病的防治提供科學(xué)依據(jù)。
　　采集疑似病雞的組織病料，通過(guò)SC增菌液對(duì)沙門(mén)氏菌進(jìn)行增菌

2、培養(yǎng)。用XLD瓊脂平板對(duì)沙門(mén)氏菌進(jìn)行分離培養(yǎng)。選取純培養(yǎng)物的單個(gè)菌落，分別進(jìn)行生化鑒定、血清學(xué)鑒定和PCR鑒定等，共獲得55株沙門(mén)氏菌分離株。這些菌株包含4個(gè)血清群，A群6株，B群23株，C群1株，D群25株。其中D群約占45％，為沙門(mén)氏菌優(yōu)勢(shì)血清群。
　　采用CSLI推薦的K-B瓊脂法測(cè)定55株沙門(mén)氏菌分離株對(duì)18種抗菌藥物的敏感性。結(jié)果顯示，55株沙門(mén)氏菌分離株對(duì)利福平、阿莫西林、青霉素G、苯唑西林以及頭孢噻吩的耐藥率達(dá)到10

3、0％;對(duì)紅霉素、林可霉素、多粘菌素B、復(fù)方新諾明及呋喃妥因耐藥率達(dá)到90％以上;對(duì)強(qiáng)力霉素、鏈霉素及諾氟沙星的耐藥率在50％～90％之間:對(duì)慶大霉素及大觀霉素的耐藥率在10％以下，分別為7.27％、3.64％。
　　利用PCR方法檢測(cè)55株沙門(mén)氏菌分離株的16種耐藥基因blaTEM、 blaPSE、blaCMY、aadA1、Aph(3)-Ⅱa、aadA2、tetB、tetG、tetM、tetX、Sul1、Sul3、 qnrA、qn

4、rB、qepA、qnrS。結(jié)果顯示，55株沙門(mén)氏菌分離株中，含有3種耐藥基因的菌株比例為25.45％，含有5種耐藥基因的菌株比例為21.82％，含有2種耐藥基因的菌株比例為21.82％，含有4種耐藥基因的菌株比例為20.00％，含有1種耐藥基因和7種耐藥基因的菌株比例分別為3.64％和1.82％。在所檢測(cè)耐藥基因中，tetX的檢出率最高，達(dá)到78.18％，而blaPSE、Aph(3)-Ⅱa、aadA2、qnrA、qnrB則未被檢出。

5、r>　　利用PCR方法檢測(cè)55株沙門(mén)氏菌分離株的31種毒力基因（質(zhì)粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD;毒力島基因invH、sipA、sipB、sopA、sopD、avrA、hilA、iacP、prgK、ssaB、ssaQ、sifA、sseL、ssrA、ttrB、mgtC、 misL、rmbA、rhuM、sugR、orf319、siiD(spi4D)、siiE、spi4H、sopB、pipC)。結(jié)果顯示，質(zhì)粒毒力基

6、因的檢出率均在60％以上;毒力島基因ttrB和orf319檢出率最高(92.73％)，而ssaQ以及sifA檢出率均在10％以下。
　　通過(guò)小鼠致病性試驗(yàn)檢測(cè)55株沙門(mén)氏菌分離株的致病性。結(jié)果顯示，所有分離株對(duì)小鼠均具有致病性，但致死的時(shí)間和劑量有所差異。隨機(jī)選取其中10株進(jìn)行測(cè)定，其半數(shù)致死量(LD50)介于3.18×108cfu/mL和4×107 cfu/mL之間。
　　以上研究結(jié)果表明，本研究分離鑒定獲得的55株雞源致