泰山松花粉多糖對水貂肺炎克雷伯氏菌莢膜多糖亞單位疫苗的免疫增強效果.pdf

1、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae，K.pneumoniae)是一種能夠?qū)е露喾N動物患病的條件性致病菌，屬于產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的腸桿菌屬，β-內(nèi)酰胺酶可以水解含氧亞氨基側(cè)鏈的廣譜頭孢菌素及單胺類抗生素藥物，并能介導(dǎo)細(xì)菌對這些抗生素產(chǎn)生耐藥。該菌主要定植在患病動物及人的呼吸道和腸道，可引起呼吸道、消化道、泌尿道等多個部位感染。產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的細(xì)菌具有多重耐藥的特性，使得臨床的治療成為一個棘手的問題。

2、過去人們一直認(rèn)為肺炎克雷伯氏菌對畜禽等多種動物的危害不大，因此一直未受到重視。但是，近些年來有關(guān)肺炎克雷伯氏菌引起毛皮動物疾病的報道迅速增加，加上其本身耐藥性的產(chǎn)生，作為一種人畜共患傳染病的病原，應(yīng)該受到廣泛的重視。莢膜多糖(caps ular polysaccharide，CPS)作為帶莢膜細(xì)菌的保護(hù)性抗原及毒力因子，是細(xì)菌疫苗最重要的靶抗原之一。具有被開發(fā)利用為亞單位疫苗的潛力。因此，本研究對肺炎克雷伯氏菌莢膜多糖進(jìn)行提取，以泰山松

3、花粉多糖、蜂膠等作為免疫佐劑制成亞單位疫苗，為肺炎克雷伯氏菌的免疫防控提供新的技術(shù)支撐及理論依據(jù)。
　　取病死水貂的病變組織肝、肺、氣管組織等材料分離純化細(xì)菌，對分離出的細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)特征、生化特性檢查、藥敏試驗和16S rRNA基因序列的分子鑒定。經(jīng)試驗得知，從病死水貂的肺、肝、氣管組織等同時檢出一種細(xì)菌。綜合分析得知分離出的菌株為肺炎克雷伯氏菌。
　　采用十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)沉淀多糖、乙醇除核酸、苯酚除蛋白的方

4、法提取肺炎克雷伯氏菌莢膜多糖(CPS-K)。并將其分別加入泰山松花粉多糖、蜂膠和弗氏佐劑等體積配比制成亞單位疫苗。將40只雄性昆明小白鼠隨機分為4組，分別為松花粉組(Ⅰ)、蜂膠組(Ⅱ)、弗氏佐劑組(Ⅲ)和莢膜多糖(CPS)對照組(Ⅳ)，分別于3d、7d、14 d對小鼠進(jìn)行三次免疫，在首免后每隔7d檢測一次淋巴細(xì)胞增值率、外周血抗體效價、外周血白細(xì)胞介素-2(IL-2)含量及CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比含量，共檢測8次。試驗結(jié)果表明