CLIC1和ECH1在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：統(tǒng)計(jì)資料顯示，惡性腫瘤躍居我國城市居民疾病死因首位，國外腫瘤是其次于心血管疾病的第二大致病因素，侵襲、轉(zhuǎn)移是其惡性生物學(xué)行為的原因，其中淋巴道轉(zhuǎn)移主要是上皮來源的腫瘤轉(zhuǎn)移的方式，也是腫瘤早期的主要轉(zhuǎn)移方式，但是其作用機(jī)制不清楚。本實(shí)驗(yàn)室通過比較小鼠腹水型肝癌高低淋巴道轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的差異因子，尋找在淋巴道轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮作用的蛋白?；蛐酒偷鞍捉M學(xué)方法得到大量差異表達(dá)的因子，為腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制深入研究提供了靶點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)氯離

2、子通道蛋白1（CLIC1）和烯酰水合酶輔酶1（ECH1）在mRNA和蛋白水平在高淋巴道轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Hca-F中高表達(dá)，可能在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用。CLIC1作為膜通道蛋白，具有可溶型和膜結(jié)合型兩種形式，分布各種組織中，參與重要生理過程。近年報(bào)道CLIC1在多種腫瘤中高表達(dá)，但是未見關(guān)于淋巴道轉(zhuǎn)移方面的報(bào)道。ECH1分布于過氧化物酶體，是脂肪酸β氧化過程中加水反應(yīng)的關(guān)鍵酶，在多種腫瘤中異常表達(dá)，但也未見腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移方面的報(bào)道。本文主要

3、研究CLIC1和ECH1在小鼠腹水型肝癌高淋巴道轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Hca-F和低淋巴道轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Hca-P的細(xì)胞定位及蛋白表達(dá)差異，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 方法：小鼠腹水型肝癌高淋巴道轉(zhuǎn)移株Hca-F和低淋巴道轉(zhuǎn)移株Hca-P作為研究對象，觀察細(xì)胞免疫熒光和免疫化學(xué)染色檢測定位情況，并以Westen Blot方法檢測蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果： 細(xì)胞免疫熒光：CLIC1在Hca-F和Hca-P均有表達(dá)，位于細(xì)胞漿、細(xì)胞膜。但是

4、兩株細(xì)胞株細(xì)胞膜定位差異不是很明顯。ECH1在Hca-F和Hca-P中均有表達(dá)，位于細(xì)胞漿。 細(xì)胞免疫化學(xué)染色：CLIC1在Hca-F和Hca-P中均有表達(dá)，位于細(xì)胞漿、細(xì)胞膜。染色強(qiáng)度+++；在Hca-P的染色強(qiáng)度++，并且鏡下隨機(jī)選取10個視野，觀察細(xì)胞膜定位的比率，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示CLIC1在Hca-F和Hca-P中的膜定位表達(dá)沒有明顯差異（P>0．05）。ECH1在Hca-F和Hca-P中均有表達(dá)，主要位于細(xì)胞漿；Hca

5、-F強(qiáng)度+++，Hca-P強(qiáng)度++。圖像分析CLIC1在Hca-F的IOD/area是0．48，在Hca-P的IOD/area是0．42，P<0．05；ECH1在Hca-F的IOD/area是0．324，在Hca-P的IOD/area是0．285，P<0．05。 Wstern Blot：定量軟件分析CLIC1、ECH1和β-actin的光密度值（IOD），以CLIC1在Hca-P中的表達(dá)相對值為1，在Hca-F中高表達(dá)1．6倍，

6、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05），同樣的方法得到ECH1在Hca-F中表達(dá)較Hca-P高1．5倍，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 結(jié)論：CLIC1表達(dá)于Hca-F和Hca-P的胞漿和胞膜，兩者之間的細(xì)胞膜定位沒有明顯的差異，并且CLIC1在Hca-F中的表達(dá)明顯高于Hca-P；ECH1表達(dá)于Hca-F和Hca-P的胞漿，在Hca-F的表達(dá)明顯高于Hca-P，與基因水平和蛋白水平的的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，更加證明了CLIC1和ECH1在肝