來那度胺在套細(xì)胞淋巴瘤治療中的價值及其機(jī)制的研究.pdf

1、套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）是一種臨床治療具有挑戰(zhàn)性的B細(xì)胞惡性淋巴瘤，病程進(jìn)展快，預(yù)后極差。MCL大約占所有非霍奇金淋巴瘤（NHL）的2．8-6%，具有獨(dú)特的形態(tài)學(xué)、免疫表型和細(xì)胞遺傳學(xué)特征，主要表現(xiàn)為染色體t（11；14）（q13；q32）易位導(dǎo)致cyclin D1過表達(dá)及細(xì)胞周期紊亂。盡管MCL患者通常對常規(guī)一線治療有效，但最終極易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，中位生存期僅3-4年。因此，臨床急需高效低毒的新靶向藥物和免疫治療來改善MCL患者的生存及預(yù)后

2、。 來那度胺（LEN）作為一種新型抗腫瘤藥物已被FDA批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)或難治性多發(fā)性骨髓瘤。雖然LEN的確切作用機(jī)制尚不明確，但研究表明LEN可直接靶向腫瘤細(xì)胞及其微環(huán)境發(fā)揮抗腫瘤活性。LEN對多發(fā)性骨髓瘤的顯著療效推動了其在NHL中的擴(kuò)大應(yīng)用并顯示出初步的抗腫瘤活性。因此，本研究探討了LEN單藥或聯(lián)合治療對MCL細(xì)胞的抗腫瘤作用，并試圖闡明其可能的作用機(jī)制，為今后臨床應(yīng)用LEN為基礎(chǔ)的聯(lián)合治療方案提供了有力的臨床前數(shù)據(jù)。

3、 第一部分來那度胺與地塞米松體內(nèi)外抑制套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究 目的:評價LEN與DEX聯(lián)合治療MCL是否具有疊加或協(xié)同效應(yīng)，并闡明其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。 方法: LEN、DEX或兩藥聯(lián)合（LEN/DEX）體外分別作用于MCL細(xì)胞系及從MCL患者骨髓或外周血中分離出的新鮮原代腫瘤細(xì)胞，通過分析細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期分布和凋亡情況，判斷LEN/DEX方案抗MCL細(xì)胞的疊加或協(xié)同效應(yīng)。用West

4、ern blot方法探討其誘導(dǎo)MCL細(xì)胞凋亡的機(jī)制。建立MCL異種移植物動物模型，用以評價LEN/DEX方案的體內(nèi)抗MCL活性。 結(jié)果: LEN與DEX可有效抑制MCL細(xì)胞系MINO和來源于MCL患者的新鮮腫瘤細(xì)胞的增殖以及誘導(dǎo)其凋亡。細(xì)胞周期分析表明LEN本身對細(xì)胞周期分布無作用，但能夠增強(qiáng)DEX介導(dǎo)的G0/G1細(xì)胞周期阻滯作用。LEN/DEX聯(lián)合主要通過線粒體途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，表現(xiàn)為促凋亡蛋白p-Bcl-2，Bax和Ba

5、d表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致caspase-9、caspase-3活化和PARP表達(dá)，且研究發(fā)現(xiàn)原代腫瘤細(xì)胞對藥物的敏感性高于MCL細(xì)胞系。此外，LEN/DEX聯(lián)合還可以明顯減緩MCL-免疫缺陷（SCID）鼠體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的生長并改善荷瘤鼠的生存時間。 結(jié)論: LEN/DEX方案體內(nèi)外可有效抑制MCL細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)其凋亡。本研究結(jié)果表明LEN是一種很有前景的治療MCL的靶向藥物，并為LEN/DEX方案治療復(fù)發(fā)和難治性MCL的臨床試驗提供了

6、有利的理論依據(jù)。 第二部分來那度胺增強(qiáng)美羅華介導(dǎo)的套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞殺傷的雙重作用機(jī)制 目的:抗CD20單克隆抗體美羅華（RTX）主要通過誘導(dǎo)凋亡和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）可有效治療MCL，LEN作為一種新型免疫調(diào)節(jié)劑具有致敏腫瘤細(xì)胞及增強(qiáng)ADCC的作用。本研究旨在闡明LEN增強(qiáng)RTX殺傷MCL細(xì)胞的作用機(jī)制。 方法:分別用LEN、RTX或兩藥聯(lián)合（LEN/RTX）作用于三種MCL細(xì)胞系SP53、

7、MINO、Grant519和從3例復(fù)發(fā)或難治性MCL患者骨髓或外周血中分離出的新鮮腫瘤細(xì)胞，以及來源于正常人外周血的單個核細(xì)胞（PBMCs），測定腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的情況以及RTX誘導(dǎo)的ADCC效應(yīng)，分析LEN/RIX方案的體外抗MCL的細(xì)胞毒作用。采用Western blot方法探討藥物誘導(dǎo)MCL細(xì)胞凋亡的信號途徑，同時闡明LEN增強(qiáng)RTX誘導(dǎo)的ADCC效應(yīng)的分子機(jī)制。建立MCL異種移植物動物模型，評價LEN/RTX方案的體內(nèi)抗MCL

8、作用。 結(jié)果:LEN和RTX在體外可有效抑制MCL細(xì)胞系和新鮮的原代MCL細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)其凋亡。研究表明，LEN促進(jìn)RTX誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用主要通過上調(diào)JNK、Bcl-2磷酸化；增加線粒體細(xì)胞色素c（cyto c）的釋放；增強(qiáng)caspase-3，-8，-9活化和PARP裂解。同時，LEN能激活自然殺傷（NK）細(xì)胞，增加CD56lowCD16+NK細(xì)胞的CD16表達(dá)，含有NK細(xì)胞的全PBMCs在LEN（1μM）作用下可使RTX介