紅系細胞凋亡在惡性淋巴瘤貧血發(fā)病機制中的意義.pdf

1、第一部分:淋巴瘤血清紅細胞生成素和干細胞因子濃度變化的意義 目的：研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者血清紅細胞生成素(Epo)和干細胞因子(SCF)濃度的變化，并與正常對照組和缺鐵性貧血(IDA)患者進行比較，分析這兩種細胞因子濃度變化與Hb濃度的相關(guān)性，評價NHL貧血組血清Epo濃度與貧血程度的適應(yīng)性，探討SCF對淋巴瘤貧血發(fā)病機制的可能影響。方法：采集未抗凝的外周靜脈血標本，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)對血清E

2、po和SCF濃度進行測定。 結(jié)果：1.血清Epo濃度：IDA組和NHL貧血組的血清Epo水平均高于正常對照(p＜0.001和p＜0.001)；NHL貧血組的血清Epo水平低于IDA組(p＜0.01)；正常對照組與無貧血NHL組血清Epo水平無差異(p＞0.05)；NHL貧血組血清Epo水平高于無貧血NHL組(p＜0.01)；相對于貧血程度，NHL貧血組的血清log(Epo)測定值(O)/log(Epo)預(yù)測值(E)比值低下；2.

3、血清SCF濃度：IDA組和NHL貧血組高于正常對照組(p＜0.001和p＜0.01)；無貧血NHL組與正常對照組相比無差異(p＞0.05)；IDA組高于NHL貧血組(p＜0.05)；IDA組血清log(SCF)濃度與Hb濃度之間具有一定的負相關(guān)；NHL貧血組SCF血清log(SCF)濃度與Hb濃度之間無明顯相關(guān)。 結(jié)論：1.NHL貧血組患者的血清Epo水平與其貧血程度不相適應(yīng)，與IDA組相比，低于其應(yīng)具有的水平。Epo水平的低下

4、，同NHL貧血的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)；2.在IDA中，血清SCF濃度水平的增高可能是對貧血的一種反應(yīng)。在NHL貧血患者，SCF血清濃度水平的變化也可能同貧血的病理生理機制有一定聯(lián)系。 第二部分骨髓紅系細胞凋亡、增殖及Epo-EpoR-STAT5信號通路在惡性淋巴瘤貧血中的意義 目的:探討骨髓紅系細胞凋亡、增殖狀態(tài)及紅細胞生成素(Epo)-紅細胞生成素受體(EpoR)-信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄活化子5(STAT5)信號通路在惡性淋巴瘤貧

5、血發(fā)病機理中的意義。 方法:以轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(CD71)和血型糖蛋白A(GPA)作為紅系標志，采用三色流式細胞術(shù)檢測骨髓紅系細胞的凋亡率、增殖率及EpoR的表達；在體外以重組人Epo(rHuEpo)刺激惡性淋巴瘤患者骨髓單個核細胞(MNC)，以熒光素標記的抗磷酸化STAT5a(pSTAT5a)抗體，檢測STAT5a的活化狀態(tài)。 結(jié)果:惡性淋巴瘤骨髓紅系CD71+細胞和GPA+細胞凋亡率明顯高于正常對照組，差異具有非常顯著意

6、義(44.28±24.52對11.07±7.16；p＜0.001和47.79±28.37對11.35±5.98，p＜0.001)；增殖率也明顯高于正常對照組(49.63±31.68對28.47±13.63，p＜0.05和50.63±28.74對29.59±9.81，p＜0.05)；EpoR表達的平均熒光強度(MFI)低于正常對照組，但差異不具有顯著意義(15.14±15.79對17.82±15.64，p＞0.05和12.92±13.98

7、對15.08±8.93，p＞0.05)。CD71+細胞和GPA+細胞凋亡率與血紅蛋白(Hb)水平呈一定的負相關(guān)(r=-0.6009，p＜0.05和r=-0.6122，p＜0.05)；EpoR表達與Hb水平無明顯相關(guān)(r=0.2511，p＞0.05和r=0.0773，p＞0.05)；rHuEpo刺激后的紅系細胞磷酸化STAT5a的表達與對照組相比沒有顯著差異。 結(jié)論:紅系細胞凋亡率增高同惡性淋巴瘤貧血的發(fā)病機制有關(guān)，紅系的明顯增殖

8、可能是對凋亡的反饋調(diào)節(jié)；EpoR表達水平降低不是惡性淋巴瘤貧血發(fā)病的普遍機制；惡性淋巴瘤貧血患者紅系細胞Epo刺激后的Epo-EpoR-STAT5a信號通路不存在缺陷。 第三部分:非霍奇金淋巴瘤骨髓紅系細胞死亡受體TNFR1、Fas表達同紅系細胞凋亡的關(guān)系 目的：探討非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓紅系細胞膜表面腫瘤壞死因子(TNFR1)及Fas表達同紅系細胞凋亡的關(guān)系。 方法：以三色流式細胞術(shù)檢測骨髓CD71+

9、紅系細胞膜表面TNFR1、Fas表達和熒光DNA染料7-氨基放線菌素D(7AAD)染色陽性率，在設(shè)門的基礎(chǔ)上分析CD71+Fas+、CD71+Fas-、CD71+TNFR1+、CD71+TNFR1-細胞中7AAD染色陽性細胞占全部CD71+細胞的比率。以活化的caspase3熒光標記抗體檢測CD71+細胞胞漿中活化caspase3的表達。 結(jié)果：NHL患者CD71+細胞的Fas和TNFR1表達率分別為63.8±17.39和18.

10、31±20.97。在全部CD71+細胞中，CD71+Fas+細胞的7AAD+細胞比率高于CD71+Fas-、CD71+TNFR1+和CD71+TNFR1-細胞。CD71+細胞胞漿中活化caspase3表達為14.3±5.86。 結(jié)論：NHL紅系細胞凋亡主要發(fā)生在Fas+細胞中。紅系細胞的凋亡可能主要由Fas/FasL系統(tǒng)的活化所誘導。 第四部分:干細胞因子與促紅細胞生成素聯(lián)合應(yīng)用對非霍奇金淋巴瘤貧血患者紅系生成的作用

11、 目的：探討體外液體培養(yǎng)條件下干細胞因子(SCF)與紅細胞生成素(Epo)協(xié)同刺激對非霍奇金淋巴瘤(NHL)貧血患者骨髓紅系造血的作用。 方法：將NHL貧血患者骨髓單個核細胞(MNC)接種于液體培養(yǎng)基，在無細胞因子條件下和分別添加了SCF,Epo及SCF+Epo的刺激條件下培養(yǎng)7天，通過計算紅系恢復(fù)性增生份數(shù)和流式細胞術(shù)評價紅系的增生和分化。 結(jié)果：在正常對照組和NHL組，SCF+Epo刺激條件下的紅系恢復(fù)性增生份數(shù)

12、高于Epo單獨刺激者，差異具有顯著性意義(P＜0.01和P＜0.02)。在NHL組，紅系恢復(fù)性增生份數(shù)＞1者在Epo處理組為6/11例，占54.54％，在SCF+Epo處理組為8/11例，占72.72％。Epo或SCF+Epo刺激培養(yǎng)7d后的紅系分化主要處于分化早期的原始紅細胞階段，流式細胞術(shù)分析顯示紅系分化以CD71陽性細胞為主。在對照組及NHL組，與單用Epo刺激相比，SCF+Epo刺激培養(yǎng)后的CD71陽性紅系細胞比率增高，差異具有