蘋果鈣依賴蛋白激酶MdCPK1：分子克隆、表達(dá)、定位及被脫落酸的激活.pdf

1、在果實(shí)發(fā)育過程中，脫落酸是一種重要的調(diào)節(jié)因子。從脫落酸的產(chǎn)生到激發(fā)生理反應(yīng)要經(jīng)過一系列相互緊密聯(lián)系的級(jí)聯(lián)環(huán)節(jié)。蛋白激酶所催化的蛋白質(zhì)磷酸化過程在細(xì)胞生命活動(dòng)的許多過程都起著重要的調(diào)節(jié)作用，在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中處于核心地位。因此，揭示脫落酸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中相關(guān)蛋白激酶的生理功能具有重要科學(xué)意義?！　”緦?shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)蘋果果實(shí)中存在受脫落酸激活的鈣依賴蛋白激酶，為研究鈣依賴蛋白激酶在蘋果果實(shí)發(fā)育中的功能，以新紅星/海棠果實(shí)中的RNA為模板，根

2、據(jù)鈣依賴蛋白激酶基因的保守序列，設(shè)計(jì)合成簡(jiǎn)并引物，通過RT-PCR方法克隆了715bp的中間保守序列，經(jīng)過DNA序列測(cè)定和NCBIBlast分析，其與鈣依賴蛋白激酶基因有很高的同源性?！　榱诉M(jìn)一步研究MdCPK1的功能，通過RT-PCR方法，從果實(shí)總RNA中擴(kuò)增1632bp的MdCPK1的完整的基因編碼區(qū)和MdCPK1的N端可變區(qū)162bp片斷。利用DNA重組技術(shù)，將其連接到原核表達(dá)載體pGEX-4T-1，構(gòu)建了全長(zhǎng)基因原核表達(dá)載體