桑枝皮醇溶物的有效成分及其體外生物活性.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以湖桑32桑樹(shù)枝條皮為材料,用醇水溶液浸提方法制備桑枝皮醇溶物(MBBEE)。采用有機(jī)溶劑萃取和大孔樹(shù)脂吸附兩種分離方法對(duì)桑枝皮醇溶物有效成份進(jìn)行分離與純化,并對(duì)MBBEE及其各個(gè)組分進(jìn)行總黃酮、總酚、總糖、總單寧酸及游離氨基酸含量的測(cè)定及體外生物活性探究。MBBEE經(jīng)有機(jī)溶劑萃取可分成石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和剩余水相五個(gè)部分,其中正丁醇相和水相為主要組份,其對(duì)DPPH自由基清除能力的抑制中值(IC50)分別為0.

2、16 mg／mL和0.10 mg／mL；正丁醇相對(duì)酪氨酸酶的抑制作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它萃取組分,IC50值達(dá)到5.2μg／mL,而水相對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性最強(qiáng),其 IC50值為2.5μg／mL。MBBEE經(jīng)D101大孔樹(shù)脂吸附分離后,獲得占質(zhì)量比為44％穿透相、34％水洗脫相、21％醇水相(30％乙醇溶液洗脫部分)和2％乙醇相(無(wú)水乙醇溶液洗脫部分)四個(gè)部分。應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)MBBEE及其四個(gè)部分游離糖類、1-脫氧野尻霉素(DNJ)

3、、槲皮素、蘆丁及白藜蘆醇等重要成份含量進(jìn)行了測(cè)定。穿透相和水洗脫相的游離氨基酸含量分別達(dá)到14568μg／g和17902μg／g,其中γ-氨基丁酸的含量分別為580μg／g和518μg／g,果糖含量分別為177.30 mg／g和129.15mg／g,具有α-葡萄糖酶抑制活性的DNJ含量分別為1.9 mg／g和0.76 mg／g,槲皮素含量分別為46.05 mg／g和56.03 mg／g。與MBBEE原有α-葡萄糖苷酶抑制活性(IC50值

4、為2.75μg／mL)相比,經(jīng)大孔樹(shù)脂吸附后這種抑制活性主要集中在穿透相和水洗脫相,其IC50值分別為1.7μg／mL和2.3μg／mL。醇水相中糖類含量最高的是鼠李糖,為233.95 mg／g；槲皮素及蘆丁的含量分別為69.52 mg／g、62.19 mg／g；且醇水相對(duì)酪氨酸酶的抑制作用及對(duì)DPPH自由基的清除能力都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 MBBEE及其它組分,IC50值分別達(dá)到0.25μg／mL和142μg／mL。本實(shí)驗(yàn)還采用半制備 HPLC法

5、對(duì)醇水相中主要成分(F2色譜峰)進(jìn)行了分離、純化和制備,經(jīng) LC-MS、UV光譜、熒光光譜、1H NMR和13C NMR波譜分析,鑒定該成分為氧化白藜蘆醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖-3'-O-β-D-吡哺葡萄糖苷,即桑皮苷 A(Mulberroside A)?；钚苑治霰砻魃Ｖζご继嵛锛捌浯妓鄬?duì) DPPH自由基的清除能力及酪氨酸酶的抑制活性主要來(lái)自桑皮苷 A,其IC50分別為35.33μmol／L和0.07 nmol／L。