黃芩有效成分的提取及其生物轉(zhuǎn)化.pdf

1、該文以黃芩素為目標(biāo)產(chǎn)物，旨在建立高效穩(wěn)定的黃芩總黃酮提取方法和黃芩苷生物轉(zhuǎn)化方法。 考察了水煎煮法、乙醇回流法、乙醇室溫浸提法對(duì)黃芩總黃酮收率和純度的影響，結(jié)果表明乙醇室溫浸提法明顯優(yōu)于其它兩種方法。確定乙醇室溫浸提法的工藝條件為：50％乙醇室溫浸提3次，每次24h；酸沉溫度40℃；酸沉pH為0.5。平行試驗(yàn)顯示，該工藝穩(wěn)定性好，黃芩總黃酮的平均收率為7.68％。精制后黃芩苷得率為2.56％，純度為98.14％。 黃芩的

2、保藏或炮制方法不當(dāng)，均能造成有效成分含量的下降，究其原因是黃芩根部的β-D-葡萄糖苷酸酶能夠水解黃芩苷和漢黃芩苷。用醋酸緩沖液從粘毛黃芩根中抽提出粗酶，繼而用硫銨沉淀法、DEAE-celluloseDE-52離子交換法純化了黃芩苷-β-D-葡萄糖苷酸酶。SDS-PAGE測(cè)定為電泳單點(diǎn)純，相對(duì)分子質(zhì)量是58.4kDa。 以黃芩苷為底物進(jìn)行酶性質(zhì)的研究，結(jié)果顯示，黃芩苷-β-D-葡萄糖苷酸酶反應(yīng)最適溫度50℃，最適pH5.0；在溫度

3、低于70℃，pH在4.0～7.0之間酶活力穩(wěn)定；Ca2+、Zn2+對(duì)酶活力幾乎沒有影響，Mg2+對(duì)酶有微弱的激活作用，而Cu2+有微弱的抑制作用，F(xiàn)e3+顯著抑制酶活力。上述結(jié)果對(duì)黃芩生藥的保藏、黃芩炮制方法的改進(jìn)具有重要意義，同時(shí)也可為酶法轉(zhuǎn)化黃芩苷的可行性提供依據(jù)。 利用植物酶進(jìn)行黃芩苷的生物轉(zhuǎn)化成本較高，因此從自然界中篩選了能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生黃芩苷-β-D-葡萄糖苷酸酶的微生物，并確定轉(zhuǎn)化條件。結(jié)果表明sp.48g菌經(jīng)誘導(dǎo)，產(chǎn)酶