海人酸致癇模型大鼠腦組織中orexin mRNA及陽性細(xì)胞的表達.pdf

1、目前的抗癲癇藥物大多通過降低神經(jīng)元興奮性或增加抑制性神經(jīng)遞質(zhì)起作用。癲癇的發(fā)生被認(rèn)為是中樞內(nèi)γ-氨基丁酸(GABA)抑制作用減弱或缺乏的結(jié)果。Orexin又稱hypocretin，1998年發(fā)現(xiàn)于下丘腦，與食欲有關(guān)，包括orexin-A和orexin-B(又稱為hypocretin-1和-2)，均為orexin前體的分解產(chǎn)物，其受體有2種亞型D--orexin1R及orexin2R，廣泛分布于整個中樞神經(jīng)系統(tǒng)，此后又發(fā)現(xiàn)其與交感神經(jīng)活動

2、，以及睡眠與覺醒狀態(tài)的調(diào)控有關(guān)，而對于其與癲癇的有關(guān)研究，有實驗證實orexin能增強GABA電流，反復(fù)癲癇發(fā)作患者腰穿腦脊液中orexin-A濃度少于非癲癇患者。因此，orexin可能與癲癇的發(fā)生或控制有關(guān)。
　　本研究采用海人酸腹腔注射誘發(fā)大鼠癲癇急性發(fā)作，并分別在發(fā)作終止后的第8h、1d、3d、7d和慢性復(fù)發(fā)時間點行實時逆轉(zhuǎn)錄PCR方法檢測大鼠大腦皮層、海馬和下丘腦中的prepro-orexin mRNA表達量，免疫組化方法

3、檢測prepro-orexin，orexin-A和orexin-B免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞及其神經(jīng)纖維數(shù)量，以闡明orexin在癲癇發(fā)作中的作用。結(jié)果如下：
　　1.實時逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測prepro-mRNA表達：大鼠致癇發(fā)作中止后，其prepro-orexin mRNA表達量在皮層與海馬部位呈現(xiàn)先增高后回復(fù)趨勢，且在皮層與海馬變化趨勢大體一致，在1d組處prepro-orexin mRNA表達量增高均達到最大量，相對于對照組，倍數(shù)分別為

4、3.170857±0.271和2.788±0.075；而在下丘腦處則呈現(xiàn)先減少后回復(fù)趨勢，其表達量在1d組處達到最少，為對照組的0.597±0.020倍。
　　2.免疫組化檢測：
　　(1)prepro-orexin免疫陽性細(xì)胞分布在下丘腦和穹窿周圍核；各組之間prepro-orexin陽性細(xì)胞數(shù)差異并不顯著，但其變化曲線總體是下降的，尤其在致癇后的第7天出現(xiàn)了變化較大的減少；prepro-orexin免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維數(shù)

5、量稀少，主要分布在下丘腦、丘腦室旁核及海馬。
　　(2)Orexin-A免疫陽性細(xì)胞分布集中于下丘腦和穹窿周圍核；8h組細(xì)胞數(shù)顯著減少，與其他各區(qū)組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；其他相鄰組間差異并不具有統(tǒng)計學(xué)意義；整體細(xì)胞數(shù)變化，呈現(xiàn)出先減少，后回復(fù)，再減少趨勢；orexin-A神經(jīng)纖維的檢測，其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布廣泛，8h組顯著增加，與其他各組相比，除1d組外，其值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義，神經(jīng)纖維曲線變化呈現(xiàn)先升高，后下降，再次升高的趨勢。

6、
　　(3)Orexin-B免疫陽性細(xì)胞的分布局限于下丘腦和穹窿周圍核，在海馬有可疑的陽性，8h組陽性最高，其次3d組；細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)為先減少后回復(fù)，之后減少再回復(fù)趨勢，在7d組處顯著減少，與其他各組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；orexin-B神經(jīng)纖維的檢測，其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布廣泛，數(shù)量呈現(xiàn)出與其細(xì)胞數(shù)相反的變化。
　　綜上所述，Prepro-rexin mRNA，orexin細(xì)胞數(shù)及其神經(jīng)纖維在大鼠癲癇發(fā)作后的變化，表明其可能參與了