體外培育牛黃對海人酸致癇大鼠的干預作用.pdf

1、目的：大鼠海馬局部注射海人酸，誘導建立顳葉癲癇大鼠模型，給予體外培育牛黃、卡馬西平干預，觀察大鼠的行為學、腦電圖改變和病理學改變，分析體外培育牛黃對顳葉癲癇大鼠的干預作用，探討其可能的作用機制，了解體外培育牛黃治療人類顳葉癲癇的可能性。 方法： 1.實驗動物及分組：雄性Witar大鼠68只，體重280～300g，隨機分四組，分別為：癲癇模型組(第1組)、體外培育牛黃組(第2組)、卡馬西平組(第3組)：各22只：海馬CA3

2、腹后區(qū)定位組(第4組)2只。 2.通過腦立體定向技術，向大鼠海馬腹后區(qū)注射海人酸，建立顳葉癲癇動物模型，觀察其癇性發(fā)作級別，發(fā)作等級在Ⅲ級～Ⅴ級的大鼠進入本實驗。 3.給藥方法：按Racine分級標準判定造模成功，入選各組后，第2組(體外培育牛黃組)及第3組(卡馬西平組)即首次給藥，第1組(模型組)給予相同量生理鹽水。 1)第4組(海馬CA3腹后區(qū)定位組)：進針后注入美藍(亞甲藍)，術后10小時處死大鼠，對照大鼠

3、腦立體定向圖譜，觀察定位準確性。 2)各組正常飼料喂養(yǎng)。 3)癲癇模型組用灌胃器灌注生理鹽水2ml，1/日，共三天。 4)卡馬西平組：用灌胃器灌注卡馬西平0.1g，1/日，共三天。 5)體外培育牛黃組：用灌胃器灌注人工牛黃0.1g，1/日，共三天。 4、觀察指標：觀察大鼠行為學變化，腦電圖改變，測定大鼠海馬CA3區(qū)殘留錐體細胞、GABA能神經(jīng)元的的數(shù)量及海馬CA3區(qū)苔狀纖維的變化。 5、統(tǒng)

4、計分析：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5軟件包進行統(tǒng)計分析，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用S-N-K法(P<0,05)。 結(jié)果： 1、行為學：反復癇性自發(fā)發(fā)作，每周發(fā)作1-3次，均為1-3級發(fā)作。體外培育牛黃組、卡馬西平組癲癇發(fā)作次數(shù)少于模型組，并且明顯的活動量多，體重恢復快。 2、腦電圖：3天組大鼠手術側(cè)顳區(qū)出現(xiàn)棘波發(fā)放，7天組擴展至對側(cè)區(qū)域，并發(fā)展為周期性叢集性慢波，30天組大鼠左右側(cè)幾乎同時出現(xiàn)陣發(fā)

5、棘波發(fā)放。同模型組相比，體外培育牛黃組、卡馬西平組腦電圖表現(xiàn)癲癇波發(fā)放明顯較少。 3、HE染色：術后3天，3組大鼠手術側(cè)海馬CA3區(qū)出現(xiàn)明顯的神經(jīng)元變性和壞死。術后7天,CA3區(qū)分層結(jié)構(gòu)逐漸紊亂甚至消失，壞死灶周圍可見較多淋巴細胞浸潤。術后30天，手術側(cè)CA3區(qū)錐體細胞顯著丟失。手術側(cè)CA3區(qū)受損最重，CA1區(qū)次之，齒狀回及對側(cè)神經(jīng)元受損最輕。手術側(cè)海馬CA3區(qū)殘存的細胞數(shù)三組間兩兩比較差別均有顯著性統(tǒng)計學意義，p<0.01。說

6、明體外培育牛黃及卡馬西平均對CA3區(qū)錐體細胞有保護作用，但效果略差于卡馬西平。 4、免疫組化顯示：GABA能陽性神經(jīng)元數(shù)目三組間兩兩比較差別均有顯著性統(tǒng)計學意義。當已形成致癇灶，GABA能抑制性中間神經(jīng)元數(shù)目越多，后期癇性發(fā)作的被抑制可能性越大。本實驗數(shù)據(jù)顯示，同模型組相比，體外培育牛黃對CA3區(qū)GABA能抑制性中間神經(jīng)元作用有明顯的保護作用，但效果不及卡馬西平。 5、手術側(cè)海馬CA3區(qū)苔狀纖維分布面積的統(tǒng)計結(jié)果顯示：牛

7、黃組與模型組相比p<0.01，兩組差別有顯著性統(tǒng)計學意義：牛黃組與卡馬西平組相比p>0.1，兩組差別無顯著性統(tǒng)計學意義。兩治療組CA3區(qū)苔狀纖維分布的面積的統(tǒng)計結(jié)果與CA3區(qū)殘存錐體細胞的統(tǒng)計結(jié)果不一致。提示，體外培育牛黃除有保護CA3區(qū)錐體細胞的作用外，還可能在苔狀纖維側(cè)支生芽的其他機制上發(fā)揮影響，確切機制尚需進一步研究。 結(jié)論： 1、向一側(cè)海馬腹側(cè)注射海人酸能成功建立顳葉癲癇模型。 2、體外培育牛黃組大鼠在毛

8、色光澤、活動量、采食水及等方面明顯優(yōu)于模型組，提示：體外培育牛黃能明顯改善致癇鼠的行為學表現(xiàn)；還可降低大鼠致癇后的防御反應分級，減少致癇鼠的癲癇波發(fā)放。 3、本實驗證實，體外培育牛黃可以減輕KA致癇大鼠的神經(jīng)病理學改變，保護海馬結(jié)構(gòu)的神經(jīng)元，尤其對海馬CA3區(qū)影響最大。 4、體外培育牛黃對CA3區(qū)GABA能抑制性中間神經(jīng)元有明顯的保護作用。 5、體外培育牛黃除有保護CA3區(qū)錐體細胞的作用外，還可能在苔狀纖維側(cè)支生