HO-1在UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化是各種原因所致腎臟疾病進(jìn)行性發(fā)展的共同病理特征。腎間質(zhì)纖維化的程度與腎功能損害程度有很高的相關(guān)性，故常以間質(zhì)纖維化作為評(píng)價(jià)腎臟疾病進(jìn)展程度的可靠指標(biāo)。血紅素氧合酶-1(haeme oxygenase-1，HO-1)廣泛分布于哺乳動(dòng)物多種組織細(xì)胞的微粒體中，在腎臟中，它主要分布于腎皮質(zhì)的近端、遠(yuǎn)端小管及髓質(zhì)的集合管上皮細(xì)胞內(nèi)。近年來(lái)研究表明，它具有抗氧化、抗炎、抗調(diào)亡和改善微循環(huán)的作用，是對(duì)腎臟具有保護(hù)作用的一種細(xì)胞因子

2、。Otterbein[1]等發(fā)現(xiàn)，HO-1是通過(guò)抑制核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的活性，下調(diào)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1，MCP-1)，對(duì)腎臟具有保護(hù)作用。在近期的國(guó)外研究中[2]，也有體外試驗(yàn)表明通過(guò)誘導(dǎo)HO-1表達(dá)增加，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growthfactor,TGF-β1)表達(dá)減少，延緩腎間質(zhì)纖維化的

3、進(jìn)展。國(guó)內(nèi)已有研究報(bào)道[3]，在5/6腎切除的大鼠模型中，誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)，可明顯減輕慢性腎衰竭大鼠腎臟病理學(xué)損傷，延緩腎臟病變。但HO-1在單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral ureteralobstruction，UUO)模型腎間質(zhì)中的表達(dá)及其與TGF-β1、MCP-1的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外研究很少。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)輸尿管結(jié)扎造成腎間質(zhì)纖維化，從細(xì)胞因子水平探討HO-1對(duì)腎臟的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。 方法：選擇健康雄性Wistar

4、大鼠54只，體重180-220克，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(A組，n=18)，UUO組(B組，n=18)，氯化血紅素(Hemin)組(C組，11=18)。術(shù)后3、7、14天分批處死，又將每組隨機(jī)分為N3、N7、N14組，每組各6只。所有大鼠均在溫度(23±2)℃，相對(duì)濕度為(55±2)％下自由進(jìn)食水。將各組大鼠以水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉后，行左側(cè)恥骨上切口，沿左腎下極尋找到左側(cè)輸尿管，在中上1/3處用4號(hào)線上下結(jié)扎兩處，然

5、后從中間剪斷輸尿管，以防逆行性感染，建立單側(cè)輸尿管梗阻模型。假手術(shù)組僅游離輸尿管但不結(jié)扎。術(shù)后各組大鼠均正常進(jìn)食水。Hemin組大鼠以Hemin混懸液50μg/(Kg·d、)灌胃給藥，1次/日；假手術(shù)組和UUO組大鼠用等量的生理鹽水灌胃, 1次/日。三組均于術(shù)前一天開(kāi)始灌胃，并于術(shù)后第3、7、14天處死大鼠，迅速取出左腎，按冠狀位縱形切開(kāi)，取腎組織的1/2置于4％多聚甲醛固定液固定和石蠟包埋，所有的組織被制成5μm切片。光鏡HE、Mas

6、son染色觀察腎臟病理變化。采用免疫組織化學(xué)染色測(cè)定腎小管間質(zhì)HO-1、MCP-1、TGF-β1的表達(dá)，結(jié)果應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：大體觀察，左側(cè)腎臟病理學(xué)改變：A組大鼠腎臟外觀正常，大小如黃豆。梗阻大鼠的患側(cè)腎臟體積隨梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增大，增大的腎臟內(nèi)

7、可見(jiàn)明顯積水，積液清亮透明，腎皮質(zhì)隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸變薄，腎盂擴(kuò)張，腎盞乳頭受壓，穹隆部乳頭變平鈍，部分成凹形，乳頭萎縮。光鏡觀察，A組HE和Masson染色未見(jiàn)異常。B組術(shù)后3天腎小管輕度擴(kuò)張，間質(zhì)中少量單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，腎間質(zhì)寬度增加；B組7天可見(jiàn)腎小管擴(kuò)張明顯，上皮細(xì)胞變性、水腫、甚至壞死，腎間質(zhì)較多淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)寬度明顯增加，偶見(jiàn)萎縮腎小管；B組14天上述病變加重，可見(jiàn)腎小管基底膜彌漫性增厚、皺縮、甚至斷裂，皮質(zhì)

8、及外髓萎縮的腎小管較多，間質(zhì)中大量淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維化較明顯。Masson染色顯示：在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)，C組和B組。腎間質(zhì)病變的程度較A組明顯增高(P＜0.05)，而C組與B組相比腎小管間質(zhì)病變程度明顯減輕(P＜0.05)。免疫組化結(jié)果顯示：在假手術(shù)組，HO-1，MCP-1和TGF-β1均在腎小管上皮細(xì)胞中有極少量的表達(dá)；在B組和C中，隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，HO-1的表達(dá)均明顯降低，但這兩組各時(shí)相點(diǎn)HO-1的表達(dá)均明顯高于A組；與B組相比，

9、C組中HO-1的表達(dá)在各時(shí)相點(diǎn)明顯增高。B組和C組，3天時(shí)MCP-1表達(dá)較假手術(shù)組輕度增高，7天時(shí)表達(dá)至高峰，14天時(shí)表達(dá)減少；C組較B組同時(shí)相點(diǎn)MCP-1的表達(dá)均降低，但這兩組各時(shí)相點(diǎn)MCP-1的表達(dá)均明顯高于A組。B組和C組中，TGF-β1于各時(shí)相點(diǎn)隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)，其表達(dá)量呈進(jìn)行性升高，且隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)升高程度更加明顯，至第14天表達(dá)最強(qiáng)，C組較B組同時(shí)相點(diǎn)TGF-β1的表達(dá)均降低，但這兩組各時(shí)相點(diǎn)均明顯高于A組。除A組組內(nèi)三種因