HCMV感染對HEL細胞細胞周期相關(guān)因子Cdt1與Geminin表達的影響.pdf

1、目的研究人胚肺成纖維(human embryonic 1ung fibroblastic，HEL)細胞細胞周期相關(guān)因子Cdt1與Geminin的表達狀態(tài)及人類巨細胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)感染對兩者表達的影響，探討HCMV’感染可能的發(fā)病機制。 方法用血清饑餓法同步化HEL細胞于G<,0>/G<,1>期，流式細胞術(shù)檢測細胞周期；用HCMV感染同步化的HEL細胞作為感染組，同時設模擬感染組為對照組

2、。用倒置相差顯微鏡觀察兩組細胞形態(tài)學變化至感染后168小時。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收獲細胞，提取總的RNA，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術(shù)檢測Cdtl-mRNA和Geminin-mRNA的表達水平。 結(jié)果 1、模擬感染組未見細胞形態(tài)學改變，感染組感染后36h即可見局部細胞變圓、膨脹，胞體及胞核巨大化，168h時可見所有細胞均發(fā)生病變。 2、分別用含0.5﹪，

3、1﹪，2﹪和10﹪新生牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HEL細胞，48小時后收獲細胞，結(jié)果顯示處于G<,0>/G<,1>期的HEL細胞所占百分數(shù)分別為82.8﹪，78.4﹪，69.9﹪，43.8﹪。新生牛血清濃度為0.5﹪時，細胞同步化較理想，所同步化的HEL細胞可用于試驗。 3、12h、24h、48h和72h兩組HEL細胞Cdtl-mRNA表達水平均有顯著性差異(P<0.05)，12h和24h感染組較模擬感染組明顯降低，48h和72

4、h時感染組較模擬感染組明顯升高。將其制成時間與Cdtl-mRNA表達水平線圖顯示，模擬感染組在感染后12h時Cdtl-mRNA表達水平最高，感染組在感染后48h達最高峰。 4、12h、24h、48h和72h兩組HEL細胞Geminin-mRNA表達水平均有顯著性差異(P<0.05)，12h和24h感染組較模擬感染組明顯增加，48h和72h時模擬感染組較感染組明顯升高。將其制成時間與Geminin-mRNA表達水平線圖顯示，感染組